EPO在缺氧条件下促进人U251细胞SUMO-1、GLUT-1的表达并在缺血条件下抑制小鼠MBP的表达

发布时间：2020-04-01 18:17

【摘要】：目的构建氯化钴(CoCl_2)作用下的神经胶质瘤U251细胞缺氧模型和左侧颈总动脉结扎的小鼠缺血模型并对其效果进行评价以后,讨论促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)在缺氧条件下对U251细胞小泛素样修饰蛋白-1(small ubiquitin-like modifier,SUMO-1)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)表达的影响以及在缺血条件下对小鼠碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)表达的影响,为研究EPO对新生儿缺氧缺血性脑病的神经细胞保护机制奠定基础。方法1.CCK-8法检测不同浓度、不同时间CoCl_2对U251细胞活性的影响。2.实时荧光定量PCR(quantitative real-time RT-PCR,qPCR)法检测不同浓度CoCl_2作用下不同组U251细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible-1,HIF-1α)mRNA表达的变化。3.细胞流式术检测CoC1_2对U251细胞活性氧(ROS)水平的影响。4.U251细胞缺氧模型构建成功后,CCK-8法测定缺氧条件下EPO对U251细胞增殖的影响。5.高通量测序技术筛选CoCl_2组和CoCl_2+EPO组的差异表达基因。6.qPCR法对高通量测序结果中的和神经细胞保护作用相关的差异表达基因SUMO-1、GLUT-1进行验证。7.构建小鼠左侧颈总动脉结扎的缺血模型:取46只(雌雄各半)3周龄昆明小白鼠随机分成假手术组、缺血组(各组n=23),假手术组仅分离左侧颈总动脉,缺血组分离左侧颈总动脉并结扎,术后2周颈椎脱臼处死,提取小鼠脑组织的mRNA,qPCR法检测MBP基因表达的变化。8.小鼠缺血模型构建成功后,取46只(雌雄各半)3周龄的小白鼠随机分成缺血组、EPO治疗组(各组n=23),EP0治疗组按0.01ml/g,1次/日,腹腔注射EPO,缺血组腹腔注射等量生理盐水。1周后颈椎脱臼处死并提取小鼠脑组织mRNA,qPCR法检测MBP基因表达的变化。结果1.通过CCK-8实验和qPCR检测HIF-1α实验筛选出U251细胞的CoCl_2最佳浓度是400μmol/ml;流式细胞实验显示400μmol/ml CoCl_2组的活性氧强度显著高于0μmol/ml CoCl_2组,差异具有统计学意义(P0.05)。2.CCK-8实验检测得出缺氧条件下EPO最佳浓度是75IU/ml。3.高通量测序技术筛选出CoCl_2组和CoCl_2+EPO组与神经保护相关的差异表达基因为SUMO-1、GLUT-1。通过qPCR法验证,结果表明与高通量测序结果相符。4.小鼠在左侧颈总动脉结扎术后2周,处死并提取脑组织中的mRNA,运用qPCR法检测得出缺血组相比假手术组MBP表达量增高,差异具有统计学意义(P0.05),提示小鼠缺血性脑损伤模型构建成功。5.缺血性脑损伤模型构建成功以后,小鼠腹腔注射EPO 1周,处死并提取脑组织中的mRNA,运用qPCR法检测得出EPO治疗组相比缺血组MBP表达量降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论1.成功构建了U251细胞的CoCl_2缺氧模型,并研究得出EPO可以在缺氧条件下促进U251的增殖及SUMO-1、GLUT-1的表达。2.成功构建了小鼠左侧颈总动脉结扎的缺血模型,并证实了EPO可以在小鼠缺血性脑损伤模型中降低MBP的表达。
【图文】：

内蒙古医科大学硕士研究生学位论文 细胞流式术测定 CoC12对 U251 细胞活性氧（ROS）强度的影响oC12诱导下的 U251 细胞缺氧环境，可以引起 U251 细胞损伤并生成粒体膜电位阈值，最终导致细胞毒性和细胞凋亡。通过采用 DCFH-胞给细胞装载荧光探针观察活性氧 ROS 水平变化情况，运用流式细得出，作用于 U251 细胞 48 小时以后 400μ mol/ml CoC12组细胞的显高于 0μ mol/ml CoC12组细胞，差异具有统计学意义（P<0.05） 2）。

内蒙古医科大学硕士研究生学位论文 细胞流式术测定 CoC12对 U251 细胞活性氧（ROS）强度的影响oC12诱导下的 U251 细胞缺氧环境，可以引起 U251 细胞损伤并生成粒体膜电位阈值，最终导致细胞毒性和细胞凋亡。通过采用 DCFH-胞给细胞装载荧光探针观察活性氧 ROS 水平变化情况，，运用流式细得出，作用于 U251 细胞 48 小时以后 400μ mol/ml CoC12组细胞的显高于 0μ mol/ml CoC12组细胞，差异具有统计学意义（P<0.05） 2）。
【学位授予单位】：内蒙古医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R722.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王立平;;基于“因材施教,充分释放学生潜能”的教学案例研究——“细胞的结构和功能”复习课教学设计[J];中学生物学;2017年05期

2 高畅;;说说我们的细胞情境教室[J];中国教师;2017年13期

3 付晓星;;2017年高考生物考点略观[J];考试与招生;2017年05期

4 钮闻婧;;IB课程与上海高中生命科学“细胞结构”部分的比较与思考[J];现代教学;2017年Z3期

5 余自强;;细胞的系统观[J];生物学通报;1987年12期

6 刘怀琼;热力学与休克细胞的研究[J];国外医学.麻醉学与复苏分册;1988年05期

7 俞立发;;观察水绵细胞结构的简易方法[J];生物学通报;1988年12期

8 郁礼兴;;镁对心脏疾病的影响[J];上海医学;1988年01期

9 张鸿卿;连慕兰;宋平根;李素文;柳惠图;游劲松;薛绍白;;活细胞的离心淘洗分离[J];细胞生物学杂志;1988年01期

10 ;组织学[J];中国医学文摘(基础医学);1989年01期

相关会议论文 前10条

1 隋森芳;;电子显微学研究的新前沿:从分子向复杂结构层次的过渡[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

2 吴波;周晓军;;虚拟病理切片及其实现[A];第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议论文汇编[C];2005年

3 ;第三届细胞结构与功能的信号基础研讨会日程安排[A];第三届细胞结构与功能的信号基础研讨会论文摘要[C];2010年

4 徐钢;;外气调“像”法对健康的影响[A];中国医学气功学会2012年学术研讨会论文集[C];2012年

5 黄耀熊;;对单个活态细胞结构与功能及其分子分布与相互作用进行监测的显微测定技术[A];第十次中国生物物理学术大会论文摘要集[C];2006年

6 吴志奎;张亚强;;应用细胞CT技术对前列腺炎组织细胞结构和DNA荧光强度的观察[A];中国中西医结合学会泌尿外科专业委员会第三届全国学术会议论文汇编[C];2001年

7 张亚强;吴志奎;;应用细胞CT技术对前列腺炎组织细胞结构和DNA荧光强度的观察[A];第五次全国中西医结合泌尿外科学术会议论文汇编[C];2005年

8 黄耀熊;袁志坚;陈文心;周平;;对蛋白、细胞结构与功能及其与药物相互作用进行监测的显微测定技术[A];药物相关蛋白质组学专题研讨会论文集[C];2006年

9 张波;程茜;陈明;钱梦

本文编号：2610797