血管内皮生长因子基因治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

发布时间：2020-04-07 01:04

【摘要】： 目的：新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy HIE)是新生儿的常见疾病，其病情重，病死率高，并可产生永久性神经功能障碍。缺氧缺血是HIE发生的本质。改善新生儿脑缺氧，减轻脑损伤，对脏的预后具有重要意义。血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)，又称血管通透因子(Vascular pleamity factor VPF)，作用于血管内皮细胞VEGFR，通过细胞内信号传导系统，最终导致血管内皮细胞的增殖，迁移及诱导血管生成，同时VEGF具有减少神经细胞凋亡，神经保护等生物学作用。本实验根据VEGF的这些生物活性，将负载有鼠VEGF120cDNA的真核表达质粒pCDNA 3.1注射至新生鼠缺氧缺血脑损伤局部，探讨VEGF对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-ischemic brain damage HIBD)的治疗作用。方法：一、构建真核表达载体PCDNA3.1/rVEGF120。二、通过结扎左颈总动脉，吸入8％氧气制备左脑HIBD的新生鼠模型。三、将48只7日龄SD大鼠随机分为两组：(一)、对照组制备HIBD后，即刻通过前囟注射空载质粒100μg/只，回笼喂养7天；(二)、治疗组，制备HIBD模型后，即刻通过前囟注射载有rVEGF120基因的质粒100μg/只，回笼喂养7天。在规定时间内，断头处死，即刻取出大脑，，每组各取6例。三、免疫组化脑组织在经4％甲醛固定后，常规石蜡包埋，应用LSAB法检测VEGF蛋白的表达情况。四、蛋白点杂交取新鲜脑组织，提取总蛋白，用点杂交仪加样后，测定VEGF蛋白的表达情况。五、流式细胞仪将脑组织制成单细胞悬液后，上机检测脑细胞的凋亡情况。结果：免疫组化及蛋白点杂交结果示：治疗组VEGF蛋白表达明显高于对照组(灰度分析P＜0.05)，免疫组化示：VEGF高表达于缺血大脑皮质，海马的神经细胞，胶质细胞，及血管内皮细胞(P＜0.05)。流式细胞仪结果示：治疗组的脑细胞凋亡率明显低于对照组(P＜0.05)。结论:一、脑内注射外源性VEGF基因，在大脑皮质及海马处神经细胞，神经胶质细胞及血管内皮细胞胞浆中高度表达。二、外源性的VEGF可以减少脑细胞的凋亡。本实验的研究为H刃BD的治疗提供一条新的探索途径。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R722.1

【参考文献】