新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的亚低温治疗

发布时间：2020-04-09 20:42

【摘要】： 新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)是严重危害新生儿健康的疾病，可导致新生儿死亡及存活者遗留严重的神经系统后遗症，目前尚缺乏特效治疗措施。亚低温(28℃-35℃轻中度低温)具有抑制细胞代谢和酶的活性，延缓细胞死亡的作用。近年逐渐被儿科医生所重视。本研究用新生大鼠HIBD模型，以脑组织含水量、HE染色、微管关连蛋白-2(micro-tubule associated protein-2，MAP-2)免疫组化染色作为短期观测指标，以大鼠的学习、记忆功能作为长期观测指标，系统研究亚低温对HIBD的短期和长期保护作用，探讨亚低温治疗的最佳时机，深度，持续时间。 对象：Wistar7日龄新生大鼠，随机分到各项实验的各组：(1)探讨不同温度对HIBD的短期影响，包括29℃干预组、31℃干预组、34℃干预组、常温(37℃)恢复组、正常对照组(假结扎组)。(2)探讨不同低温持续时间对HIBD的短期影响，包括24小时、48小时、72小时低温干预组及常温(37℃)恢复组、正常对照组 郑州大学2002年研究生毕业论文 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的亚低温治疗 （假结扎组人 D）探讨不同低温起始时间对iBD的短期影响， 包括HI后0分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟、6小时 低温干预组及常温u7 C广恢复组、正常对照组（假结扎组人 以 上各低温干预组每组22只动物。正常对照组每组20只动物。低 温干预组各取2只做探针动物，用以监测脑温。门）探讨低温干 预对HIBD的长期影响，包括＊后立即29℃低温干预72 ’J＼时组、 常温门7℃）恢复组、正常对照组（假结扎组人每组10只动物， 方法：＊）新生大鼠MBD模型制作：新生大鼠乙醚吸入麻醉， 切开颈部皮肤，分离左侧颈总动脉并结扎，l小时后给予吸入8％ 氧气加 92％氮气混合气体 55分钟。正常对照组（假结扎组）仅 切开颈部皮肤，分离左侧颈总动脉，不结扎亦不缺氧。u）亚低 温方法：将动物放入半导体可调恒温水浴箱内，维持至干预结束。 3）脑组织含水量测定：各组动物均于缺氧缺血后78小时处死， 快速取脑，除去嗅脑、小脑和脑干，分离左右侧大脑半球，用电 子天平精确称量，然后烘干再称重，用公式【（湿重－干重）／湿 重〕XI 00％计算脑组织含水量。N）病理学检测：各组动物于缺 氧缺血后78小时处死，快速取脑，5％甲醛溶液中固定后，，于前 联合及正中隆起平面作冠状切开，取中间部分常规脱水，石蜡包 埋。切片取AI．6mm平面，连续冠状切片6张，分作HE染色 2 郑州大学2002年研究生毕业论文 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的亚低温治疗 和 MAP上免疫组织化学染色。染色结果经图象分析系统处理， 计算出脑梗塞的面积，然后根据公式：（损伤侧MAPZ染色阴性 区域面积／对侧面积）XI 00％计算脑损伤程度u）学习、记忆能 力指标测定：各组动物于生后42天用Y型三等份辐式迷宫器检 测其学习能力，第H天用同样方法检测其记忆能力。“）统计学 分析：应用 SPSS 10．0统计分析软件，结扎侧与结扎对侧比较 采用配对t检验，多组均数比较用单因素方差分析…ne－way ANOVA＞组间两两比较用q检验，对数据进行统计学分析。数 据均以巨士SD表示，以P刃．05为差异有显著性。 结果：门）HE染色：常温恢复组镜下可见到各种病理学改变， 包括神经细胞的变性坏死等。而低温干预各组上述改变较轻。＊） 常温恢复组结扎侧脑组织含水量明显增加，与结扎对侧及正常对照 组相比差异有显著性0狈．05人而低温干预各组脑组织含水量明 显减少，与常温恢复组相比差异有显著性p刃．05人（）常温恢 复组结扎侧可见脑梗塞存在，而低温干预各组脑梗塞面积明显减少 oo．05人K）不同温度低温干预对 HIBD大鼠的影响：29 oC低 温干预组与3lOC、34oC低温干预组相比，脑组织含水量减少，差 异有显著性o狈．05人 31、34oC低温干预组相比，脑组织含水 量差异无显著性。不同温度低温干预各组脑梗塞面积相比，差异 3 郑州大学2002年研究生毕业论文 新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的亚低温治疗 均有显著性o川．05），且随着温度的降低，梗塞面积逐渐减少。 u）不同持续时间低温干预对WBD大鼠的影响：72小时低温 干预组与24小时与4S小时低温干预组相比，脑组织含水量减少， 差异有显著性o的．05）；24小时、48小时低温干预组相比，脑 组织含水量差异无显著性。低温干预各组脑梗塞面积相比差异均 有显著性oO．05人 且随着低温于预持续时间的延长，梗塞面积 逐渐减少。u）不同起始时间低温干预对HIBD大鼠的影响：0分 韦、30分钟起始干预组与其余各低温干预组（60分钟、90分钟、 120分钟、6小时起始低温干预组）相比，脑组织含水量减少，差 异有显著性0刃．05人 但这两组间差异无显著性，其余各
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图1不同温度干预对HIBD大鼠的影响:(1)29℃低温干预组、(2)31℃低温干预组、(3)34℃低温干预组(4)常温恢复组(5)正常对照组不同持续时间低温干预对HIBD大鼠的影响;(6)24小时低温干预组、(7)48小时低温干预组、(8)72小时低温干预组(9)常温恢复组(10)正常对照组不同起始时间低温干预对HIBD大鼠的影响:(11)H工BD后立即低温干预组、(12)HIBD后30分钟低温干预组、(13)HIBD后60分钟低温干预组(14)HIBD后90分钟低温干预组(15)HIBD后120分钟低温干预组(16)HIBD后6小时低温干预组、(17)常温恢复组(18)正常对照组MAP一2免疫组化染色，扫描仪直接扫描切片所得图像

正常对照组，冠状切片AI.6mm平面，皮质，MAP一2免疫组化染色4OOX
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：R722.121

【参考文献】

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1 吴婉芳;徐放生;张莉莉;蔡玲玲;林久治;;建立新生儿缺氧缺血性脑病动物模型[J];新生儿科杂志;1992年06期

本文编号：2621239