【摘要】： 目的探讨不同剂量头孢克洛(Cefaclor)和双歧杆菌(Bacillus bifidus,BB)对幼鼠肠道免疫系统发育和肠道菌群的影响。 方法实验选用80只SPF(specific pathogen free)级SD(Sprague-Dawlay)大鼠,7日龄,15～20克,随机分成7组:A组(7日龄组),B组(150mg/kg/d头孢克洛干预2周),C组(50mg/kg/d头孢克洛干预2周),D组(500万单位双歧杆菌干预2周),E组(1500万单位双歧杆菌干预2周),F组(500万单位双歧杆菌2小时后100mg/kg/d头孢克洛干预2周),G组(空白对照组),其中A组8只,余6组各12只,各组体重无显著差异(P0.05)。A组在第一天处死,余6组在第21天随机抽取8只处死,留取回盲部近端肠管组织及盲肠内粪便。SABC免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测肠管组织CD4+、CD8+ T细胞含量;大便涂片革兰氏染色检测革兰氏阳性杆菌(G+b)、革兰阴性杆菌(G-b)、革兰阳性球菌(G+c),革兰阴性球菌(G-c)各菌群数;16S rRNA荧光相对定量PCR法检测粪便双歧杆菌(bacillus bifidus,BB)、乳酸杆菌(lactobacillus,LB)、脆弱类杆菌(bacteroides fragilis,BF)、梭菌(clostridium botulinum,CL)4种细菌的相对含量。 结果1.CD4+、CD8+T细胞含量: 1.1 CD4+T细胞含量B、C、F组CD4+T细胞相应灰度值[分别为(158.94±10.08)、(115.29±17.39)、(107.71±16.62)]显著高于G组[(92.50±11.30)](P值分别0.01,0.01,0.05)。B、C、F三组两两比较,C组和F组均显著低于B组(P值均0.01);C组与F组两两比较无差异(P值均0.05)。D、E组CD4+T细胞相应灰度值[分别为(79.48±5.43)、(77.04±7.72)]较G组降低(P0.05),而D组与E组两两比较,差异无统计学意义(P值均0.05)。 1.2 CD8+T细胞含量B、C组CD8+T细胞相应灰度值[分别为(107.91±8.85)、(103.78±10.30)]高于G组[(80.81±14.80)](P0.05),而D、E组CD8+T细胞相应灰度值[分别为(59.28±5.81)、(58.95±7.81)]较G组降低(P0.05)。F组CD8+T细胞相应灰度值[(101.95±11.67)]与G组比较无差异(P 0.05),但高于D、E组(P值均0.01)。B、C、F三组两两比较,差异均无统计学意义(P值均0.05)。 2.肠道菌群检测结果: 2.1杆菌总数、球菌总数及其比值B、C、F组杆菌总数[分别为(177.00±3.42)、(178.63±3.42)、(178.00±3.46)]显著低于G、D、E组[分别为(196.75±1.36)、(196.88±1.25)、(196.88±0.99)] (P值均0.01)。B、C、F组球菌总数[分别为(23.00±3.42)、(21.38±3.42)、(22.13±3.52)]显著高于G、D、E组[分别为(3.25±0.89)、(3.25±1.04)、(3.13±0.99)] (P值均0.01)。B、C、F组杆球菌比值[分别为(7.86±1.31)、(8.60±1.75)、(8.24±1.42)]显著低于G、D、E组[分别为(64.42±17.27)、(66.56±22.41)、(68.58±21.19)] (P值均0.01)。B、C、F组杆菌总数、球菌总数及杆球菌比值,三组两两比较差异均无统计学意义(P值均0.05)。G、D、E组杆菌总数、球菌总数及杆球菌比值,三组两两比较差异亦均无统计学意义(P值均0.05)。 2.2 G+杆菌占总菌群数比率B、C、F组G+杆菌占总菌群数比率[分别为(13.38±1.51)%、(24.06±3.89)%、(15.50±1.95)%]显著低于G、D、E组[分别为(48.31±2.60)%、(46.56±2.03)%、(46.63±2.89)%] (P值均0.01)。其中B、C、F三组两两比较,B组和F组均显著低于C组(P值均0.01);B组与F组比较无差异(P值均0.05)。而G、D、E三组两两比较,差异均无统计学意义(P值均0.05)。 2.3 G+球菌占总菌群数比率B、C、F组G+球菌占总菌群数比率[分别为(10.50±1.60)%、(9.75±1.51)%、(10.06±1.72)%]显著高于G、D、E组[分别为(1.25±0.27)%、(1.13±0.44)%、(1.19±0.46)%] (P值均0.01)。B、C、F三组两两比较差异均无统计学意义(P值均0.05)。G、D、E三组两两比较差异亦均无统计学意义(P值均0.05)。 3. BB、LB、BF、CL4种细菌的相对含量: 3.1 BB相对含量B、C、F组BB相对含量[分别为(0.17265±0.03219)、(0.38493±0.01453)、(0.40909±0.07239)]显著低于G、D、E组[分别为(0.62473±0.08555)、(0.60160±0.05108)、(1.12013±0.38711)] (P0.01或P 0.05)。其中B、C、F三组两两比较,C组和F组均显著高于B组(P值分别0.05、0.01);C组与F组比较无明显差异(P值均0.05)。而G、D、E三组两两比较,E组显著高于G组和D组(P值均0.01), G组与D组比较无明显差异(P值均0.05)。 3.2 LB相对含量B组LB相对含量[(0.02117±0.00793)]显著低于G、C、D、E、F组[分别为(0.09233±0.04382)、(0.08768±0.00886)、(0.11830±0.01404)、(0.11705±0.01358)、(0.09298±0.05705)] (P值均0.01)。而G、C、D、E、F五组之间两两比较,差异均无统计学意义(P值均0.05)。 3.3 BF相对含量比较G、B、C、D、E、F六组之间两两比较,差异均无统计学意义(P值均0.05)。 3.4 CL相对含量B组CL相对含量[(0.00329±0.00303)]显著高于G、C、D、E、F组[分别为(0.00017±0.00015)、(0.00073±0.00065)、(0.00016±0.00022)、(0.00010±0.00004)、(0.00154±0.00029)] (P值均0.01)。F组CL相对含量均高于G、D、E三组(P值均0.05),F组与C组比较无统计学差异(P0.05)。余C、G、D、E四组两两比较,差异均无统计学意义(P值均0.05)。 结论 1.不同剂量头孢克洛均可降低SD大鼠肠道免疫能力,而不同剂量双歧杆菌对SD大鼠肠道免疫功能具有一定的正向调节作用。先予双歧杆菌后予头孢克洛,SD大鼠肠道免疫能力下降,双歧杆菌未能起到免疫保护作用。 2.不同剂量头孢克洛均可导致SD大鼠肠道菌群失调,且菌群紊乱程度与头孢克洛剂量存在相关性。大剂量双歧杆菌具有较好的调节肠道菌群的能力,小剂量双歧杆菌对肠道菌群无明显影响。先予双歧杆菌后予头孢克洛,SD大鼠出现肠道菌群紊乱,双歧杆菌不能有效维持肠道菌群平衡。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R725.7
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