云南省手足口病住院患者病原学动态分析

发布时间：2020-04-10 21:44

【摘要】：目的:手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种由肠道病毒(Enterovirus,EV)感染引起的传染性疾病,5岁以下婴幼儿为易感人群,近年来该疾病对中国大陆儿童健康造成了严重威胁。本研究旨在探究云南地区手足口病在住院患者中的病原谱构成、临床特点及其流行特点。方法:收集2010和2012-2016年云南省某医院临床诊断为手足口病的住院患儿的粪便样品和临床资料。首先对样品进行病毒核酸提取,然后利用半巢式逆转录PCR(Semi-nested reverse transcription,snRT-PCR)特异性扩增 EV 部分 VP1 序列并测序,以确定EV血清型;用SPSS20.0对检测结果和收集的临床资料进行统计与分析;对鉴定出的优势血清型,将其与国内外分离株进行核苷酸序列和氨基酸序列同源性分析,并用MEGA7.0构建系统发育树分析其进化关系。此外,用人横纹肌肉瘤细胞(Rhabdomyosarcoma cell,RD)、人肺腺癌细胞(Human lung cancer cell,A549)、人胚肺成纤维二倍体细胞(Human embryonic lung diploid fibroblasts cell,KMB17)等三种细胞进行病毒分离并测序,通过MEGA7.0和Simplot 3.5.1分子进化分析和重组分析,研究病毒的分子特征。结果:1.2010年共收集1280例手足口病住院患者样本,包括男性患者799例,女性患者481例,其中1115例实验室检测结果为阳性,共鉴定出17种EV血清型,这些病毒均能引起重症。结果显示CA16(615/1115,55.1%)、EV71(392/1115,35.2%)、CA10(45/1115,4.0%)、CA4(23/1115,2.1%)是引起手足口病的主要病原体;CA16、EV71、CA10、CA4 分别属于 C4a、B1b、G 和 C 亚型。2.2012-2016年共收集341例重症病例样本,包括191例男性和150例女性患者,其中283例实验室检测为阳性,共检测出17种EV血清型,主要病原体分别为EV71(142/341,41.6%),CA16(64/341,18.8%)和 CA6(31/341,9%),这三种主要血清型与中国大陆地区目前流行的基因型一致。3.用细胞培养的方法成功分离出两株echovirus 18(E18)病毒株,并获得全基因组序列,分析显示这两株E18病毒株均为重组株。结论:云南地区手足口病在住院患者中的临床特点和流行特点与中国大陆其他南方地区基本相似;EV71和CA16仍是引起手足口病的主要病原体,但其他肠道病毒如CA6、CA10、CA4等血清型也需要进一步加强监测。
【图文】：

肠道病毒,基因组,颗粒,结构图

图１肠道病毒结构图：（Ａ）肠道病毒颗粒；（Ｂ）肠道病毒基因组［２５］逡逑Ｆｉｇ邋１邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＥＶｓ：（Ａ）Ｖｉｒａｌ邋ｐａｒｔｉｃｌｅ邋ｏｆ邋ＥＶｓ；邋（Ｂ）邋Ｇｅｎｏｍｅ邋ｏｆ邋ＥＶｓ逡逑作用下切割为ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４，这４个结构蛋白自发组装成原体，然后以五逡逑聚体的形式结合在一起，而十五个五聚体共同构成了肠道病毒的衣壳，ＶＰ１、ＶＰ２和逡逑ＶＰ３位于衣壳表面暴露在环境中，因此很容易被宿主免疫系统识别；ＶＰ４则位于衣逡逑壳内部。由于衣壳蛋白ＶＰ１含有肠道病毒的主要抗原中和位点和抗原决定簇，可以逡逑用作评估疫苗效力的生物标志，，并且ＶＰ１序列具有基因多态性和型特异性，与肠道逡逑病毒的血清型具有高度的一致性，是肠道病毒基因分型和遗传进化分析的重要位逡逑点，目前常用聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ邋ｃｈａｉｎ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增肠道病毒ＶＰ１逡逑序列并测序，将测序结果经ＢＬＡＳＴ与ＧｅｎｅＢａｎｋ己有序列进行比对来确定其血清型，逡逑一般认为同源性大于７５％即为相同血清型［２６］。逡逑３．国内外研究进展逡逑

宿主细胞,受体

与ＥＶ７１神经发生的宿主因子，是一种潜在的用于限制神经系统并发症的药物靶点逡逑［６３］逡逑0逡逑研究表明，有多种受体可以介导ＥＶ７１进入宿主细胞，包括人清道夫受体（ｈｕｍａｎ逡逑ｓｃａｖｅｎｇｅｒ邋ｒｅｃｅｐｔｏｒ邋ｃｌａｓｓ邋Ｂ，ｍｅｍｂｅｒ邋２，邋ＳＣＡＲＢ２）、Ｐ邋选择素糖蛋白配体邋ｌ（Ｐ＿Ｓｅｌｅｃｔｉｎ逡逑ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ邋ｌｉｇａｎｄ邋１，ＰＳＧＬ－１）、树突细胞特异性捕获非整合素的细胞间黏附逡逑分子（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ邋Ｃｅｌ邋１－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋Ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ邋ａｄｈｅｓｉｏｎ邋ｍｏｌｅｃｕｌｅ－３－Ｇｒａｂｂｉｎｇ逡逑Ｎｏｎ－ｉｎｔｅｇｒｉｎ，ＤＣ－ＳＩＧＮ）以及膜联蛋白邋Ａ２（Ａｎｎｅｘｉｎ邋Ａ２，Ａｎｘ２）等。ＳＣＡＲＢ２邋可参与逡逑内吞作用、膜转运，并且通常在内膜和质膜之间穿梭。当ＳＣＡＲＢ２存在于细胞表面逡逑时，它是一种ＩＩＩ型双跨膜蛋白，具有大的细胞外结构域和短的胞质结构域。细胞逡逑表面上的人ＳＣＡＲＢ２与ＥＶ７１结合，然后ＥＶ７１被网格蛋白介导的途径内化［６４］。人类逡逑ＳＣＡＲＢ２在多种类型细胞中表达，包括ＣＮＳ中的神经元，其可能参与ＥＶ７］对大脑的逡逑直接感染［６５］。细胞表面的人ＳＣＡＲＢ２与ＥＶ７１病毒结合，ＳＣＡＲＢ２－ＥＶ７１复合物被内化，逡逑当病毒－受体复合物到达内含体或溶酶体时，ＳＣＡＲＢ２在酸性ｐＨ条件下会引发构象变逡逑化，导致病毒包被，低ｐＨ值是ＥＶ７１脱衣的关键。在病毒衣壳中发生一系列结构变逡逑化后，ＥＶ７１邋ＲＮＡ被释放到细胞质中［９］。病毒ＲＮＡ可以直接翻译成一个大的多肽，然逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R725.1

【参考文献】