亚低温对脑缺氧缺血新生大鼠海马星形胶质细胞增殖及凋亡的影响

发布时间：2020-04-11 07:36

【摘要】： 【目的】亚低温(mild hypothermia)是治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)的一种有效的方法,可通过降低脑细胞的能量代谢、减少细胞毒性产物的积聚、对抗细胞坏死等途径发挥脑保护作用。星形胶质细胞(astrocyte,AST)是脑细胞的重要组成部分,在缺氧缺血(hypoxic-ischemia, HI)后的脑损伤与修复过程中扮演重要角色。既往研究重点多集中于亚低温对神经元的保护作用,对星形胶质细胞影响的研究极少,是否存在保护作用及其机制并不明了。本研究采用在体7日龄新生大鼠脑缺氧缺血模型及体外培养海马星形胶质细胞氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)模型,观察亚低温对缺氧缺血性脑损伤后新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响,探讨亚低温对未成熟脑缺氧缺血性损伤的保护机制。 【方法】(一)在体实验：首先制备大鼠脑缺氧缺血模型,7日龄大鼠左侧颈总动脉结扎后置于含8%氧气的氮氧混合气的37℃缺氧箱中缺氧2 h。对照组大鼠仅实施假手术,不进行缺氧缺血。术后动物随机分为常温处理组、亚低温治疗组、常温对照组、亚低温对照组；分别在HI后24 h、72 h和7天制备脑片,通过免疫组化计数胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)阳性细胞来评价星形胶质细胞增殖的变化；通过免疫组化双标计数GFAP与caspase-3双阳性细胞检测星形胶质细胞的凋亡变化。(二)体外实验：培养1日龄大鼠海马星形胶质细胞,采用氧糖剥夺(OGD)方法以模拟在体缺氧缺血损伤过程,采用CCK-8、Tunel及DAPI染色观察亚低温处理后星形胶质细胞增殖和凋亡变化。 【结果】大鼠海马区域GFAP染色结果显示,HI后72 h和7天亚低温治疗组GFAP阳性细胞低于常温组,同一时间点两组比较具有统计学意义(P0.05)；HI后72 h常温处理组海马部位84.5%GFAP阳性细胞发生Caspase-3共表达,而亚低温治疗组仅32.3%。体外实验显示,OGD后亚低温处理组细胞肿胀较常温处理组轻；CCK-8结果显示亚低温治疗组AST增殖明显低于常温处理组(P0.05)；亚低温治疗组较常温处理组凋亡减少,Tunel阳性细胞明显减少(P0.05)。 【结论】亚低温能抑制新生大鼠HI损伤后海马星形胶质细胞的增殖,减轻其凋亡
【图文】：

原代及传代AST形态大鼠大脑海马细胞在接利，后3h左右开始贴壁，随后细胞由漂浮时的球形变形为卵圆形及多角形或不规则形，变形细胞常于24h内伸出突起，24h后，所有变形细胞均已贴壁。原代培养细胞成分较多，主要包括AST、神经元、纤维细胞及少突胶质细胞。AST扁平，遮光差，圆形或多角形，轮廓清楚。AST互相连接成网状。原代培养的AST可在9一12天左右生长至完全融合。传代培养的单层贴壁，形态伸展，胞体较大而扁，，形状不规则，细胞核圆形或卵圆形。AST有较强的分裂增殖能力，可在5天左右生长至完全融合。以AST特异性标志蛋白GFAP染色观察AST细胞形态及鉴定AST纯度。G队P阳性的AST呈红色薄纱样细网状，形态舒展，不规则。GFAP染色纯度鉴定与DAPI染色细胞相比较，99%以上的细胞GFAP阳性的AST，符合本实验对AST纯度的要求。

复旦大学硕士学位论文一A为原代培养的星形胶质细胞在倒置显微镜20倍物镜下的细胞形态。图4传代后AST经GFAP染色后在荧光显微镜5倍、20倍、40倍物镜下观察到D模型建立的鉴定CK一8检测OGD的细胞毒性GD0.5h、1hCCK一8，OGD组AST与对照组相t匕，无统计学意义(Ph、4hOGD组与对照组相t匕，差异有统计学意义(P<0.05)，Zh组h组与4h组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。该结果提示OGDST产生显著毒性，随着时间的延长毒性加重，3h和4h时AST出
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R722.1

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 萨丽波;李宇;;新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时Bcl-2蛋白表达的研究[J];现代医药卫生;2008年04期

2 王煜霞;李光华;黄青松;常全忠;;新生大鼠缺血缺氧性脑损伤与bcl-2基因表达的关系[J];齐齐哈尔医学院学报;2007年01期

3 李一欣;程秀永;;新生大鼠缺氧缺血再灌注后海马神经元凋亡与c-Jun蛋白的表达检测[J];郑州大学学报(医学版);2007年03期

4 俞丹;毛萌;雷明雨;;新生鼠缺氧缺血性脑损伤内源性纤维蛋白溶酶原激活剂变化及其意义[J];中国当代儿科杂志;2008年05期

5 邓永红;田朗;旷寿金;黑明燕;;肌苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤细胞色素C基因表达的影响[J];实用预防医学;2006年05期

6 李玉红,田兆方,李述庭;地塞米松预处理对缺氧缺血性新生大鼠脑组织单核细胞趋化蛋白-1表达的影响[J];南京医科大学学报(自然科学版);2002年01期

7 田兆方!210011南京,李述庭!210011南京;大剂量地塞米松降低缺氧缺血性新生大鼠脑MCP-1蛋白表达[J];中国当代儿科杂志;2000年02期

8 丁艳洁!210009,汤云珍!210009,蒋犁!210009,李海浪!210009,黄晓明,曾凡杰;脑缺氧缺血新生大鼠海马组织中c-Fos基因的表达与细胞凋亡的相关性初探[J];中华儿科杂志;2000年05期

9 张亚范,曲美玲,刘凯,王海艳;Memantine对缺氧缺血新生大鼠脑细胞钙超载的影响[J];中国基层医药;2005年07期

10 罗剑华;新生儿缺氧缺血性脑病分子细胞水平研究进展[J];中国优生与遗传杂志;2005年09期

相关会议论文 前10条

1 田兆方;杜江;王斌;洪小杨;封志纯;;大鼠骨髓来源MSCs对新生大鼠高氧肺损伤的影响[A];全国围产医学专题学术研讨会论文汇编[C];2007年

2 余资江;余彦;杨丹;决利利;周静;;新生大鼠嗅鞘细胞的体外培养及鉴定[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年

3 罗莉漫;李华强;史源;赵锦宁;唐仕芳;胡章雪;;SB203580对新生大鼠高氧肺损伤中IL-8和TGF-β_1表达的影响[A];全国围产医学专题学术研讨会论文汇编[C];2007年

4 张丽华;刘青;庞伟;杨本利;;HIBD新生大鼠微管相关蛋白Tau表达变化的研究[A];第三届全国儿童康复学术会第十届全国小儿脑瘫学术研讨会论文汇编[C];2008年

5 林晓燕;梁艳苓;陈翔;张姿英;汤行录;汤春萍;陈调和;;新生大鼠缺血缺氧脑损伤早期认知功能改变的研究[A];第三届全国儿童康复学术会第十届全国小儿脑瘫学术研讨会论文汇编[C];2008年

6 曾卫强;章艳;肖楚瑶;蒋建敏;;新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改良[A];2010年广东省药师周大会论文集[C];2011年

7 李红霞;杨向军;;人起搏通道HCN2基因在大鼠骨髓间充质干细胞的表达及其意义[A];中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议汇编[C];2008年

8 李建美;张新金;马业新;文渊;洪云飞;;促红细胞生成素对新生大鼠心脏成纤维细胞氧化应激后一氧化氮合酶系统的影响[A];第七届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2009年

9 金正勇;金美花;;三磷酸腺苷-氯化镁对新生大鼠高氧肺损伤的影响[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

10 李敏杰;刘勇;吕海侠;张蓬勃;肖新莉;李捷;康前雁;邓美英;丁海燕;;新生大鼠神经干细胞的分离培养与观察[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

相关重要报纸文章 前6条

1 北京大学基础医学院 周春燕;活体心脏带给我们什么[N];健康报;2008年

2 记者 宋克顺　通讯员 徐雁初 陈勇;十堰“神医”切除患者左脑治癫痫[N];湖北日报;2009年

3 武汉大学人民医院 副研究员 罗照春;烟草对婴儿有致命危害[N];医药养生保健报;2008年

4 朱丽丽;治小儿癫痫宜单一用药[N];健康报;2004年

5 ;无糖对体外培养的神经前体细胞损伤的影响[N];中国医药报;2003年

6 ;石菖蒲加冰片对脑皮质神经细胞保护作用及其伍用配比的研究[N];中国医药报;2003年

相关博士学位论文 前10条

1 陈晓晴;促红细胞生成素对新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型保护作用机制的研究[D];华中科技大学;2012年

2 王晓莉;高压氧治疗促新生大鼠缺氧缺血性脑损伤内源性神经干细胞的增殖、迁移与分化及其机制研究[D];中南大学;2007年

3 郝云鹏;组胺H_3受体拮抗剂对新生大鼠缺血缺氧性脑病动物模型治疗作用的研究[D];吉林大学;2010年

4 严超英;外周应用NGF对缺氧新生鼠血脑屏障通透性、吸收分布及其对脑损伤保护作用的实验及临床研究[D];吉林大学;2007年

5 张维新;针刺对围产期缺氧缺血性脑损伤大鼠NGF、BDNF、GFAP及NO/NOS的影响[D];广州中医药大学;2009年

6 安丽;激活素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用及其机制的研究[D];山东大学;2004年

7 刘波;头穴丛刺结合环境刺激对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠神经可塑性影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2010年

8 王霞;神经干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤[D];中南大学;2003年

9 田兆方;人骨髓间充质干细胞对新生大鼠高氧肺损伤的干预研究[D];南方医科大学;2007年

10 马海涵;新生大鼠半横切脊髓内胚胎脊髓移植后大脑皮层cDNA差示文库构建及部分相关基因分析[D];第三军医大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 纪卫华;褐藻多糖硫酸酯对新生大鼠缺氧缺血性损伤脑保护作用的研究[D];大连医科大学;2005年

2 尹梅;低体积分数氧预处理对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织脑红蛋白变化的影响[D];兰州大学;2009年

3 陈思源;麻黄碱对脑缺氧缺血后新生大鼠神经功能的影响[D];重庆医科大学;2010年

4 明美秀;亚低温对脑缺氧缺血新生大鼠海马星形胶质细胞增殖及凋亡的影响[D];复旦大学;2010年

5 陈宁;新生大鼠视网膜神经干细胞的分离培养与诱导分化[D];中南大学;2003年

6 熊金国;雌激素、氟桂利嗪对缺氧缺血新生大鼠脑细胞的影响[D];延边大学;2003年

7 张薇;缺血缺氧新生大鼠脑内血红素氧化酶-1和内源性一氧化碳的变化及其意义[D];第四军医大学;2002年

8 申明琪;骨髓间充质干细胞治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病的体外实验研究[D];天津医科大学;2010年

9 吉丽敏;一氧化氮抑制AngⅡ诱导新生大鼠心肌细胞肥大反应的机制[D];山西医科大学;2004年

10 苏桂云;Nogo-A、nogo受体及其途径抑制物与新生大鼠HIBD后神经再生的相关性研究[D];山东大学;2010年

本文编号：2623322