调节性B细胞在新生儿脓毒症发病中的作用及其增殖机制研究

发布时间：2020-04-16 10:26

【摘要】：研究背景新生儿脓毒症,特别是早产儿脓毒症是新生儿死亡的主要原因,也是全球公共卫生面临的主要挑战之一。免疫调节在脓毒症发病过程中的作用越来越受到重视。近年来发现了一群具有调节作用的B淋巴细胞亚群——调节性B淋巴细胞(Breg细胞),其在自身免疫性疾病、变态反应性疾病、器官移植、感染以及肿瘤等多种疾病的发生发展中发挥关键作用,但在新生儿脓毒症中的作用并不清楚。因此,深入研究新生儿脓毒症中Breg细胞的特征和调节机制,有望对降低新生儿脓毒症的发病率和死亡率提供更为有效的策略。材料与方法采集脓毒症患儿(40例)发病时、发病后7天、14天和21天及对照组(40例)新生儿外周静脉血,分别用流式细胞术和ELISA对免疫细胞及其亚群以及血浆相关细胞因子检测;同时应用新生儿PELOD-2评分对脓毒症临床严重程度评估并分析其与免疫细胞及其亚群的相关性。应用RNA-Seq对外周血mRNA测序,并经GO和KEGG富集通路分析,初步对CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞增殖分化机制进行探索。最后,通过分离脐带血单个核细胞,在体外进行诱导培养对CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞增殖分化所涉及的机制进一步探讨。结果1.外周血B细胞特别是其亚群CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi) Breg细胞,在脓毒症发病后7天显著升高并与临床严重程度呈负相关;同时还发现发病后7天血浆及CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞胞内IL-10的水平也明显升高。2.在转录水平,发现在不同发病时间点脓毒症与对照组患儿均存在显著差异,同时脓毒症患儿不同时间点之间也存在显著差异,但是对照组不同时间点之间差异无统计学意义。经GO及KEGG富集通路分析,发现机体免疫应答和mTOR代谢通路密切相关。3.与对照组相比,脓毒症患儿外周血BAFF的水平在发病时和发病后7天显著升高;在转录水平外周血BAFF-R有升高趋势。有意义的是,脐带血单个核细胞和纯化的B细胞经LPS联和CpG刺激后,BAFF和其受体BAFF-R均显著升高。4.脐带血单个核细胞中纯化的B细胞经LPS联和CpG刺激后,能显著诱导其向CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞转化;经BAFF联合LPS和CpG刺激后,能显著提高后二者诱导B细胞向CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞的转化率。5.经BAFF联合LPS和CpG刺激后,提高B细胞向CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞的转化率与其激活PI3K-mTOR通路,提高p70S6K和p4E-BP1的水平有关。结论本研究发现脓毒症患儿外周血CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞在发病后7天显著升高,其升高同时伴随胞内产生IL-10的能力明显增强。同时还发现,发病后7天脓毒症患儿血浆IL-10的水平也显著升高。有意义的是,本研究还发现升高的CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞与病情严重程度呈负相关。转录及蛋白水平发现,外周血BAFF水平的升高,通过激活PI3K-mTOR信号通路p70S6K和4E-BP1蛋白与CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi) Breg细胞的增殖分化有关。因此,本研究不但揭示了脓毒症患儿发病过程中CD19~+CD24~(hi) CD38~(hi) Breg细胞的变化规律及其增殖分化机制,还为新生儿脓毒症病情监测及免疫治疗提供了新思路。
【图文】：

逦第一章调节性Ｂ细胞在新生儿脓毒症发病中的变化特征逦逡逑１．５邋ｍｌ的ＥＰ管依次编号（Ｓ０－Ｓ６），并加入样本稀释液２５０邋４。从Ｓ７的标准品管逡逑中吸取２５０邋＾１标准品到Ｓ６中；轻轻吹打并混匀后，再从Ｓ６中吸取２５０｜＾１到逡逑Ｓ５中。然后以此类推，完成标准品的倍比稀释。Ｓ０仅加入样本稀释液作为空白逡逑对照组。即可分别获得ＩＬ－１０邋（表１－３）不同稀释倍数的标准品。在临用前１５分逡逑钟内配制。逡逑

Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋Ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＩＬ－１０逡逑．６数据统计与分析逡逑米用Ｐｒｉｓｍ邋（ＧｒａｐｈＰａｄ邋Ｓｏｆｔｗａｒｅ邋Ｉｎｃ．）和ＳＰＳＳ邋２０．０对数据进行统计分析。计逡逑资料用例数和百分数表示，采用Ｘ２检验（或Ｆｉｓｈｅｒ精确概率法）分析；正态逡逑布的数据以均值±标准差表示，统计采用ｔ检验；不符合正态分布的计量资逡逑采用从（户２５￣尸７５）描述，组间比较采用Ｍａｎｎ－Ｗｈｉｔｎｅｙ邋Ｕ检验。多组间比较采逡逑单因素方差分析或Ｋｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ检验。与脓毒症病情严重程度相关性分析采逡逑Ｓｐｅ＿ａｎ等级检验。以Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义，Ｐ＜０．０１为差异有显逡逑性意义。逡逑结果逡逑１临床样本资料的基本特征逡逑本研宄纳入研宄对象的临床资料见表１－４。脓毒症组和对照组各４０例，其逡逑脓毒症有３６例患儿存活为存活组，４例患儿死亡为死亡组。脓毒症患儿死亡逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R722.1

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本文编号：2629679