高氧致新生大鼠肺损伤T淋巴细胞动态变化的研究

发布时间：2020-04-21 20:12

【摘要】： 目的:探讨高氧致新生大鼠肺损伤过程中脾脏及胸腺中T淋巴细胞的动态变化。 方法:72只出生12小时内的清洁级Sprague-Dawley(S-D)大鼠(简称新生大鼠)作为研究对象。随机分为2组:Ⅰ、空气对照组,Ⅱ、高氧暴露组,每组36只。Ⅰ组置于正常空气中喂养,Ⅱ组置于80-85%氧浓度下喂养。分别于第1、4、7、14、21天时,以常规组织学方法观察肺脏形态结构变化;运用常规计数法检测脾脏中淋巴细胞数量变化;采用流式细胞术检测脾脏中CD4+、CD8+T细胞的百分比的变化;以混合淋巴细胞反应(MTT法)检测脾淋巴细胞对植物血凝素和自身肺组织的增殖反应;用常规组织学和免疫组化法观察胸腺形态结构变化及增殖细胞核抗原(PCNA)表达和CD4+、CD8+细胞分布。 结果:1.肺脏组织学变化:与空气对照组相比,高氧组4d时肺组织充血、水肿;7d时肺组织出血、水肿、炎性细胞浸润明显;14d时炎症反应减轻,肺间质增宽,纤维增生;21d肺泡数量减少,肺间质纤维细胞增生,肺泡节段性高充气与膨胀不全交替,形成特征性囊泡样改变。 2.脾组织中淋巴细胞数量与活性变化:实验4d时,高氧组脾脏中淋巴细胞数量开始增多,CD4+、CD8+淋巴细胞百分比较对照组明显增多(p0.01),至实验7d时,CD4+淋巴细胞百分比明显高于对照组(p0.01),此后CD4+、CD8+淋巴细胞百分比逐渐下降,到实验21d时CD4+、CD8+淋巴细胞百分比接近对照组,而绝对数明显低于对照组(p值均0.01);此外,淋巴细胞活性检验发现,实验4d至7d时,脾淋巴细胞对自身肺组织和对PHA刺激的增殖反应活性较对照组均明显增高(p值均0.01);实验14d至21d时,脾淋巴细胞对自身肺组织刺激的增殖反应活性逐渐下降,但均明显高于对照组(p值均0.01),而对PHA刺激后的增殖反应活性均明显低于对照组(p值均0.01)。 3.胸腺组织学变化:与对照组相比,实验4d至7d时,高氧组胸腺指数逐渐升高,PCNA表达逐渐增强,两组间差异均有显著性统计学意义(p值均0.01);但实验14d至21d时,高氧组胸腺指数、PCNA指数逐渐下降,其中PCNA指数在21d时已明显低于对照组(p0.01),形态学检查发现高氧组胸腺蜷曲退化,脂肪细胞及纤维细胞增生,免疫组化显示CD4+、CD8+淋巴细胞数量减少且呈区域性分布。 结论:1.80-85%高氧持续暴露21d可造成新生大鼠高氧性肺损伤,病理表现主要为肺泡节段性高充气和与膨胀不全交替的囊泡样改变等,与新生儿慢性肺损伤的病理改变相符。 2.高氧性肺损伤早期脾脏中CD4+、CD8+淋巴细胞百分比明显增高、活性逐渐增强,后期脾脏CD4+、CD8+淋巴细胞数量明显减少,淋巴细胞活性显著减低。 3.高氧性肺损伤可导致新生大鼠的胸腺发生阶段性病理改变,即病理性成熟加速迅速转变为病理性萎缩,表现为CD4+、CD8+淋巴细胞数量明显减少并呈异常的点状局限性和区域性分布。 4.高氧性肺损伤过程中有自身反应性T淋巴细胞的参与。其自身反应性损伤的发生发展与胸腺的免疫组织学改变之间存在的对应关系可能与高氧损伤诱导的胸腺病理性加速成熟有关。 5.高氧性肺损伤所致的免疫功能低下可能与胸腺异常发育及淋巴细胞亚群数量和功能紊乱有关。
【图文】：

高氧暴露对大鼠脾淋巴细胞绝对数具有明显影响，两组间计学意义（F=8.52，P<0.05）。组间比较发现高氧组 1d 至 4d 时脾脏 CD4+绝对值略高于对照组，但差异均无统计学意义（F=2.92，P=0.12；F=3.73，P 7d 时，高氧组脾脏淋巴细胞绝对值明显高于对照组，差异有显著统计=10.91，P<0.01）。实验 14d 至 21d 时高氧组脾脏 CD4+T 淋巴细胞总数稍，但差异均无统计学意义（F=3.84，P=0.07；F=1.08，P=0.32）。不同时较发现，对照组大鼠脾脏淋巴细胞绝对数在 14d 时升高达峰值，与 1d 时无统计学意义（F=0.75，P=0.4）。21d 时，对照组脾脏淋巴细胞绝对数稍低但差异无统计学意义(F=1.2，P=0.29)。而高氧组脾淋巴细胞绝对数早期增高达到峰值，与 1d 时相比，差异具有显著性统计学意义(F=18.85，P<0.01组淋巴细胞绝对数开始迅速下降，至 21d 时脾脏淋巴细胞绝对数明显低于值，差异具有统计学意义(F=6.51，P<0.05)。如图 19 所示。

7d 57.28±1.98 61.17±1.5012.58±1.11 13.07±0.5114d 54.65±2.48 53.43±1.47 12.42±0.78 11.77±0.6721d 53.42±2.10 51.85±1.74 12.20±0.98 10.78±0.42D注：与同类别对照组相比，AP<0.01, F=13.39,BP<0.01, F=14.73,CP<0.05, F=8.46DP<0.01, F=10.44分析两组大鼠脾脏CD4+、CD8+淋巴细胞百分比变化发现，高氧暴露对CD4+、CD8+淋巴细胞比率的影响随时间的延长而呈现先促进而后抑制的不同的表现。实验结果显示：在CD4+淋巴细胞百分比方面，实验4d时高氧组CD4+淋巴细胞百分比迅速升高，，至7d时达到高峰，且明显高于对照组，差异具有统计学意义（F=13.39，P<0.01）；实验14d时，高氧组CD4+淋巴细胞百分比开始逐渐降低，至21d时降低至最低点，并稍低于对照组，但差异无统计学意义（F=1.36，P=0.27）。在CD8+淋巴细胞百分比方面，实验4d时，高氧组脾脏中CD8+百分比已有明显升高，且明显高于对照组，差异有统计学意义（F=8.46，P<0.05）；实验7d时，高氧组CD8+百分比开始下降，至21d时，高氧组CD8+百分比进一步下降，且明显低于对照组，统计学分析差异有显著性意义（F=10.44，P<0.01）。如图20所示。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R722.1

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本文编号：2635691