组织化学染色方法在生长板组织学研究中的应用

发布时间：2020-04-23 12:02

【摘要】： 目的:生长板是位于长骨远端骺与干骺端之间的一层高度器官化的透明软骨。在组织学上根据软骨细胞的不同的分化阶段,可以将生长板分为不同的水平区带,即:静止软骨细胞带、增殖软骨细胞带和肥大软骨细胞带。本研究通过对正常大鼠胫骨标本进行石蜡包埋、切片后分别应用常规HE染色法、Masson三色法、AB-PAS染色法、甲苯胺蓝染色法、藏花红染色法、AZAN染色法、VG染色法、Mallory三色法、番红染色法、固绿染色法、番红-固绿染色法进行染色,比较上述多种组织学染色方法在正常大鼠胫骨生长板组织切片中的染色规律,探讨不同组织化学染色方法在生长板组织形态学研究中的应用。 方法:对正常生长发育期大鼠胫骨标本固定、脱钙后进行石蜡包埋和切片。切片脱蜡至水后分别进行(1)常规HE染色:入苏木精染液5分钟;自来水洗1分钟;入1%盐酸酒精分色数秒;自来水洗1分钟;入1%的伊红3分钟;自来水洗1分钟;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(2)Masson三色法(苯胺蓝复染)染色:入A液5分钟;0.2%醋酸稍洗;入5%磷钨酸5-10分钟;0.2%醋酸洗2次;入B液5分钟;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。Masson三色法(亮绿复染)染色:入A液5分钟;0.2%醋酸稍洗;入5%磷钨酸5-10分钟;0.2%醋酸洗2次;入B液5分钟;0.2%醋酸洗2次;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(3)AB(阿尔辛蓝)-PAS(过碘酸-Schiff)染色:蒸馏水浸洗1分钟;入3%醋酸液中3分钟;入阿尔新兰液中30分钟;入3%醋酸液3分钟;蒸馏水冲洗多次;入过碘酸氧化10分钟;自来水冲洗;蒸馏水浸洗2次;在Schiff试剂中染色10-20分钟(据室温);流水冲洗2-5分钟,蒸馏水洗片刻;用Harris苏木精液淡染核;0.5%盐酸乙醇分化数秒钟;蒸馏水洗多次;95%及无水乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。(4)甲苯胺蓝染色:入甲苯胺蓝溶液30分钟;水洗1分钟;入冰醋酸溶液中于显微镜下分色数秒;蒸馏水洗2次,各2分钟;自然风干;二甲苯透明;中性树胶封片。(5)藏花红染色:入0.1%的藏花红溶液染色2-3分钟;镜下分化数秒;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(6)“AZAN”三色法染色:入偶氮卡红液4-8小时,37度染色;切片冷却后入蒸馏水漂洗;于1 %苯胺的95%酒精液分色至淡红色;0.5%磷钨酸水溶液媒染3-5分钟;入苯胺蓝-橘黄G染液0.5-1小时;滤纸沾干后在95%酒精分色1/2-1分钟梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(7)Van Gieson染色法染色:入Weigert氏铁苏木素溶液5-10min;自来水充分洗;入Van Gieson氏液染30s-1min;95%酒精分化数秒;梯度酒精脱水;二甲苯透明;中性树胶封片。(8)Mallory一步三色法染色:重铬酸钾液10分钟;流水冲洗2分钟;蒸馏水两次;酸性复红液2分钟;蒸馏水稍洗;苯胺蓝液20分钟;95%乙醇快速分化;直接无水乙醇脱水;二甲苯透明;中性树胶封固。(9)番红染色:在1%番红染液中浸染3分钟;镜下95%酒精分化数秒;风干;二甲苯透明;中性树胶封片。(10)固绿染色:于1%固绿染液中浸染3分钟;镜下95%酒精迅速分化;风干;二甲苯透明;中性树胶封片。(11)番红-固绿染色:于1%番红染液中浸染3分钟;入1%固绿复染3分钟;95%酒精分化数秒;复加番红染色2分钟;镜下95%酒精分化数秒;风干;二甲苯透明;中性树胶封片。在OLIMPUS显微镜下观察经上述染色后的切片上的生长板组织,并进行图像采集,比较上述组织学染色方法在正常大鼠胫骨生长板组织切片中的染色规律。 结果:(1)常规HE染色:软骨组织呈蓝染,可见不同区带的软骨细胞,软骨陷窝不着色,成熟的骨小梁被染成粉红色。(2)Masson三色染色(苯胺蓝复染):软骨组织呈淡蓝色,可见不着色的骨陷窝以及不同区带的软骨细胞。骨小梁外形不规则或呈鹿角状,随着骨小梁趋于成熟,部分骨小梁中间的颜色呈红色,成熟的骨小梁呈深蓝色。骨样基质到成熟骨的染色规律为淡蓝色到深蓝色。纤维组织呈蓝色条纹状或边缘光滑团块状,中间无骨母细胞和骨陷窝。Masson三色染色(亮绿复染):软骨组织呈淡绿色,骨陷窝不着色,可见不同区带的软骨细胞。可见外形呈鹿角状的骨小梁,随着骨小梁趋于成熟,部分骨小梁中间的颜色呈红色,成熟的骨小梁呈深绿色。骨样基质到成熟骨的染色规律为淡绿色到深绿色。(3)AB-PAS染色:软骨组织呈深浅不一的蓝色,可见软骨细胞呈柱状排列,从软骨细胞静止带到肥大带蓝色渐浅,骨化中心的骨组织呈红染。生长板与周围组织界限清楚。(4)甲苯胺蓝染色:软骨组织基质呈均匀的淡紫蓝色,隐约可见呈柱状排列的软骨细胞,细胞核被染成紫色。(5)藏花红染色:软骨组织呈深浅不一的橘色,从软骨细胞静止带到肥大带染色渐浅,骨小梁被染成粉红色。软骨组织与骨组织染色后差异明显。(6)“AZAN”三色法:软骨组织呈淡蓝色,可见柱状排列的软骨细胞,生长板各区带染色均较浅,骨小梁呈蓝色,骨小梁之间可见橘红色的红细胞。(7)Van Gieson染色法:软骨组织呈淡红色,软骨细胞核呈灰黑色。骨小梁形状不规则,呈红染,其间可见棕黄色的红细胞。软骨组织与骨组织界限分明。(8)Mallory三色法:软骨组织及骨小梁为蓝染,深浅不一,骨小梁染色最深。软骨细胞核呈红色,骨小梁间红细胞呈橘黄色。(9)番红染色:软骨组织及骨小梁呈深浅不一的粉红色,从软骨细胞静止带到肥大带染色渐浅,骨小梁染色最浅。(10)固绿染色:骨小梁呈淡染的绿色,软骨细胞及其基质不着色。(11)番红-固绿染色:软骨组织呈深浅不一的粉红色,从软骨细胞静止带到肥大带染色渐浅。骨小梁呈绿色,其间红细胞被染成绿色。软骨组织与骨组织对比鲜明。 结论:在生长板组织学研究中,AB-PAS染色法、VG染色法、番红-固绿染色法能较好的将不同成熟度的软骨组织和骨组织显示出来,优于其他方法,可用于骨发育的研究中。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：R726.8

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王艺臻;徐征丽;;染料木素对大鼠髁突软骨改建影响的初步研究[J];医学研究杂志;2011年07期

2 詹兴旺;姜艳;王文良;;细胞共培养在组织工程研究中的应用及价值[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期

3 祁伟;左强;崔维顶;范卫民;;采用纤维蛋白凝胶种植技术体外构建组织工程软骨[J];江苏医药;2011年12期

4 王磊;郭恒;段王平;卫小春;;细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响[J];中国药物与临床;2011年07期

5 李祁伟;桂荣花;张立军;赵群;吉士俊;;家兔髋脱位模型中髋臼软骨病理改变的研究[J];中国医科大学学报;2011年06期

6 李楠;雒焕生;赵诣;尹玉彪;杜江;黄远鹏;王和鸣;;龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究[J];中国中医骨伤科杂志;2011年08期

7 陈义泉;沈惠良;雍宜民;胡怀建;;点种法移植软骨细胞修复关节软骨缺损[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年24期

8 李楠;雒焕生;赵诣;尹玉彪;黄远鹏;杜江;王和鸣;;龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响[J];中国中医骨伤科杂志;2011年07期

9 张平;蔡道章;刘斌;钟志宏;潘永谦;张振山;;转IL-1Ra和TGF-β1基因治疗兔骨性关节炎的体外实验研究[J];中华关节外科杂志(电子版);2011年03期

10 林永廉;余丹丹;林莺;;鹿龟颈椎方对椎间盘软骨细胞增殖的影响[J];甘肃中医学院学报;2011年04期

相关会议论文 前10条

1 杨冠;;PTEN调节软骨细胞分化并抑制软骨瘤发生[A];中国遗传学会“发育、遗传和疾病”研讨会论文汇编集[C];2007年

2 冷薇;冯文周;邹学农;;骨性关节炎(OA)临床研究进展及药物治疗[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年

3 张继帅;郝振明;谭晓红;王友亮;毛春明;吕娅歆;程萱;杨晓;;软骨细胞特异性Smad4基因剔除导致小鼠长骨发育异常[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年

4 赵阳;柳子星;王颖;张惠珍;王树军;葛海良;;大鼠IL—10真核表达载体在软骨细胞中的瞬时表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年

5 刘献祥;;毫米波抑制TNF-α诱导NF-κB信号转导通路的实验研究[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年

6 任宏造;;软骨细胞的超生结构病理[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年

7 张亚;王晓东;尹航;张锡庆;董寅生;;兔骺板软骨细胞与多孔聚乳酸、多孔丝素材料的体外相容性[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年

8 张春雷;孙美乐;姚洪菊;;抗氧化剂和透明质酸对软骨细胞的保护作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

9 张艳;柴岗;刘伟;周广东;崔磊;曹谊林;;体外培养过程中去分化的人软骨细胞基因表达谱的变化[A];第四届华东六省一市整形外科学术会议暨2007年浙江省整形、美容学术会议论文汇编[C];2007年

10 钟玉;李荣亨;;复元胶囊含药血清对软骨细胞P38信号通路的影响[A];全国第七届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前10条

1 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年

2 杨春;药物增高不可信[N];大众卫生报;2005年

3 记者 邰举;韩用猪软骨细胞制成生物材料[N];科技日报;2008年

4 南京农业大学动物医学院 王小龙;鸡胫骨软骨发育不良[N];江苏农业科技报;2005年

5 吴一福;西安交大：用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年

6 ;如何让孩子长得高[N];卫生与生活报;2003年

7 黄爱群;药物增高不可取[N];中国医药报;2001年

8 陈如为;骨关节炎折磨千万人软骨细胞缺氧是元凶[N];医药经济报;2000年

9 徐亚静;上海两项自然科学基金项目通过鉴定[N];中国医药报;2005年

10 于峰;哪些运动有助孩子长高[N];中国中医药报;2008年

相关博士学位论文 前10条

1 祁军;大鼠骺板软骨细胞体外三维培养及细胞响应力学信号的初步机制[D];华中科技大学;2011年

2 李元城;微流控芯片上胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对兔关节软骨细胞体外增殖的影响[D];大连医科大学;2010年

3 孙宝宾;鼻中隔软骨细胞与神经肽关系的实验研究[D];复旦大学;2004年

4 杨朝晖;钠离子通道阻断剂利多卡因体内外干预关节软骨的生物学效应[D];山西医科大学;2011年

5 杜佳梅;以小耳残耳软骨细胞为种子细胞的组织工程软骨的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年

6 杨运东;骨炎定对体外培养软骨细胞的影响[D];广州中医药大学;2001年

7 胡建华;骨性关节炎软骨细胞凋亡的研究[D];中国协和医科大学;1999年

8 傅捷;含软骨细胞的纤维蛋白胶修复兔关节软骨缺损的实验研究[D];第二军医大学;2000年

9 周强;异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损[D];中国医科大学;2005年

10 陈书军;组织工程软骨的构建及修复关节软骨缺损的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年

相关硕士学位论文 前10条

1 邱丽燕;人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向软骨细胞方向的诱导[D];浙江大学;2003年

2 孙和炎;自固化磷酸钙/纤维蛋白凝胶双相支架负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损的实验研究[D];安徽医科大学;2003年

3 温叶飞;耳廓软骨细胞生物学特性研究及组织工程软骨的体外构建初探[D];西北农林科技大学;2004年

4 王结果;异种关节软骨与MSCs体外共同培养的实验研究[D];南京医科大学;2010年

5 杨万波;胰岛素样生长因子对软骨细胞复合物体外成软骨能力的影响[D];武汉大学;2004年

6 王利刚;中药鹿茸生长素对家兔关节软骨细胞代谢的影响[D];江西医学院;2004年

7 王宁;等离子刀不同能量对软骨辐射效应的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年

8 孙涛;同种异体软骨细胞移植术后关节软骨蛋白多糖的测定[D];青岛大学;2003年

9 陈哲峰;利用PLA，PGA，，PLGA三种支架再生兔关节软骨的实验研究[D];南京医科大学;2005年

10 朱科俊;母源性BDE-209对子代大鼠关节软骨发育的影响[D];暨南大学;2008年

本文编号：2637705