OPCs移植对早产儿和新生儿脑白质病变的髓鞘修复作用研究
发布时间：2020-04-28 03:04
【摘要】：背景:少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPCs)是少突胶质细胞的前体细胞,其分化成熟为少突胶质细胞(oligodendrocyte,OLs),在中枢神经系统发挥成髓鞘作用。脑白质作为神经纤维的集合部位,其损害和病变将导致认知、学习、精神和运动等多种神经功能的障碍。出生前后脑发育正处于OPCs分化成熟阶段,此时的脑缺氧缺血、感染和先天缺陷等因素极易造成OPCs分化障碍和丢失,造成广泛脱髓鞘和髓鞘损害,形成早产儿和新生儿脑白质损伤(white matter injury,WMI)和脑白质营养育不良等脑白质病变相关疾病。此时内源性OPCs呈相对不足状态,通过外源性OPCs的移植,或可促进脑白质病变区域的髓鞘修复。第一章电镜评估OPCs移植对早产儿脑白质损伤的髓鞘修复作用研究目的:探讨OPCs移植对早产儿WMI模型大鼠的髓鞘修复作用。方法:32只SD仔鼠随机等分为8组(n=4),分别为假手术组、模型对照组、5d脑室移植组、5d白质移植组、9d脑室移植组、9d白质移植组、14d脑室移植组和14d白质移植组。移植组和模型对照组在仔鼠3日龄时结扎右颈总动脉+缺氧80min以建立早产儿WMI模型。5d、9d和14d移植组分别在造模后5、9和14天通过脑立体定位仪将3×105 OPCs注入脑室(脑室移植组)或白质(白质移植组)。大鼠60日龄和90日龄时取出移植位点附近胼胝体组织,电镜下观察并评估髓鞘病理,每组随机选取50个髓鞘计算g-ratio值以评估髓鞘厚度。结果:电镜下,60日龄和90日龄大鼠中假手术组髓鞘结构均正常,而模型对照组呈松散、分离和崩解的病变髓鞘形态;除60日龄9d白质移植组外,各移植组的病变髓鞘形态均相对少见,且严重程度不如模型对照组,90日龄14d移植组尤其轻微。g-ratio值结果显示,90日龄大鼠中5d白质移植组、5d脑室移植组和9d白质移植组分别与模型对照组比较平均值均显著减小(P0.05),表明髓鞘厚度增加,而与假手术组无显著差异(P0.05),其他组两两比较均无显著差异(P0.05)。电镜下髓鞘损害评分结果显示,与模型对照组比较,60日龄大鼠中除9d白质移植组外,其余移植组损害程度更轻(P0.05),90日龄大鼠中除9d脑室移植组外,其余移植组损害程度更轻(P0.05),所有组与sham组比较损害程度均显著增加(P0.05)。结论:OPCs移植对早产儿WMI模型大鼠具有一定的髓鞘修复作用,结果需要进一步证实和深入探索。第二章新生儿期OPCs移植联合康唑对先天性脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘修复作用研究目的:探讨OPCs移植联合咪康唑对脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘修复作用。方法采用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)基因敲除的shiverer鼠作为脑白质营养不良模型,shi-/-(MBP基因完全缺失)为阴性对照组(n=5)和治疗组(n=5),shi+/+(MBP基因正常)小鼠为阳性对照组(n=5)。治疗组于生后1天将OPCs移植入脑白质中,同时在生后1-5天腹腔注射咪康唑哇,对照组分别以PBS和生理盐水代替OPCs和咪康唑。小鼠8周龄时对各组行免疫荧光、Western blot和电镜评估髓鞘形成状况。结果:Western blot结果显示治疗组MBP平均表达值较阴性对照组和阳性对照组均有统计学意义(P0.05),较阴性对照组显著增强而比阳性对照组显著减弱;电镜下,治疗组髓鞘数量较阴性对照组增多,部分近似正常,但相较阳性对照组髓鞘仍呈相对松散、分离的形态。结论:新生儿期OPCs移植联合咪康唑显示出一定的促进髓鞘修复和促进髓鞘新生的能力,但结果但仍需要进一步阐明。第三章儿童脑瘫细胞治疗临床效果的系统评价和meta分析目的:评价细胞治疗儿童脑瘫的临床效果和安全性。方法:检索Embase、PubMed、Cochrane图书馆、中国生物医学文献数据库(CBM)、知网、万方和维普数据库,收集2017年4月22日之前所有细胞治疗儿童脑瘫的临床文献,制定文献纳入和排除标准以筛选文献,Jadad量表评价文献质量,提取文献数据并采用R 3.4.0软件进行统计分析,结局指标为粗大运动功能评分(gross motor function measure,GMFM)和严重不良反应(severe adverse effects,SAEs)。结果:最终纳入文献5篇,病例334例,meta分析结果显示试验组相比对照组的GMFM显著提高(SMD =0.68,P0.0001),脐血细胞亚组评分提高幅度更大(P=0.02)。试验组与对照组的SAEs发生率无显著区别(P0.05)。结论:细胞治疗儿童脑瘫的短期效果良好,但仍需要更多高质量研究的验证。
【图文】：
逦．逡逑物徽德嫩逡逑图１－２邋６０日龄和９０日龄大鼠ｇ－ｒａｔｉｏ值分布注：＊：表示户＜０．０５逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｇ－ｒａｔｉｏ邋ｓｃｏｒｅ邋ｉｎ邋６０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ａｎｄ邋９０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ｒａｔｓ逡逑ｃ邋髓鞘损害评分逡逑５－逡逑４－逡逑３＿邋１１逡逑Ｉ邋＂Ｔｌ邋Ｍ邋＂Ｉ邋（逡逑ｉ－｛逦ｉ逡逑图１－３邋６０日龄和９０日龄大鼠髓鞘损害评分分布注：浅色表示与对应日龄的模型逡逑对照组比较，尸＜０．０５逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｍｙｅｌｉｎ邋ｉｎｊｕｒｙ邋ｓｃｏｒｅ邋ｉｎ邋６０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ａｎｄ邋９０－ｄａｙ－ｏｌｄ邋ｒａｔｓ逡逑１２逡逑
逑阴性对照ａ邋治疗ｍ逦ｆｔｉｆｔ对ｉｓｍ逡逑图２－１邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ检测髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）表达Ａ：阴性对照组；Ｂ：治疗组；逡逑Ｃ：阳性对照组逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ邋ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ邋ｏｆ邋ｍｙｅｌｉｎ邋ｂａｓｉｃ邋ｐｒｏｔｅｉｎ邋（ＭＢＰ）邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋Ａ：邋ｎｅｇａｔｉｖｅ逡逑ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ；邋Ｂ：邋ｔｒｅａｔｍｅｎｔ邋ｇｒｏｕｐ；邋Ｃ：邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｇｒｏｕｐ逡逑３．２电镜结果逡逑电镜观察小鼠胼胝体区域的髓鞘结构，结果见图２－３。电镜下，治疗组髓鞘数量逡逑较阴性对照组增多，，形态均匀一致，但多数髓鞘偏薄，仅只有１？２层，相较阳性对照逡逑组髓鞘呈相对松散、分离的形态，部分髓鞘近似正常，具有多层形态且层面紧密。阴逡逑性对照组含有髓鞘形态，且残存髓鞘形态薄而紊乱。阳性对照组髓鞘明显X椂啵绣义纤枨识季哂芯纫恢碌男翁蚁嘟现瘟谱楹鸵跣远哉兆槊飨院瘢哂卸嗖阈翁咤义辖缜逦忝媾帕薪裘埽杂蟹掷胪猓嗍人缮ⅰ⒍狭训纫斐Ｐ翁ｅ义希海В库骸耍鲥义贤迹玻搽码仗迩蛩枨实缇到峁梗ǎ叮板澹埃埃埃╁
本文编号：2642991
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