从化市小儿呼吸道人类偏肺病毒感染的临床与分子流行病学特征

发布时间：2020-04-30 16:06

【摘要】：背景与目的:呼吸道感染(respiratory tract infection,RTI)是儿童发病和死亡的一个重要原因。呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、流感病毒(influenza virus,Flu)、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)是病毒性呼吸道感染的病原体。即便运用敏感有效的诊断方法,仍有1/3病例的感染源尚不明确,提示存在未知或尚未被认识的病原体。2001年,van den Hoogen BG从荷兰呼吸道感染患儿气道分泌物中分离出一种新的呼吸道病毒。根据病毒学数据、序列同源性和基因结构分析表明该病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒属,被命名为人类偏肺病毒(human metapenumovirus,hMPV)。该病毒全球分布与流行,欧洲、北美、南美、澳大利亚、亚洲、非洲等地方先后报道了大量有关hMPV感染的临床和分子流行病学特征的数据。虽然各个年龄组均可检测到hMPV感染,婴幼儿似乎对hMPV特别易感,疾病诊断包括上、下呼吸道感染。目前,尚未有关从化市hMPV感染的临床与分子流行病学特征的报道。研究从化市hMPV感染的临床与分子流行病学特征对于了解从化市hMPV感染及防治具有重要的意义。本研究的目的:(1)研究从化市小儿呼吸道hMPV感染的临床与分子流行病学特征。(2)探讨hMPV感染与小儿毛细支气管炎、支气管肺炎、支气管炎、支气管哮喘的关系。(3)通过对hMPV感染阳性PCR产物进行基因测序及种系进化分析,探讨从化市小儿呼吸道感染的hMPV分离株与其他地区hMPV分离株的同源性及基因分型的差异。(4)了解其他常见呼吸道病毒感染的临床与分子流行病学特征。材料与方法:(1)标本收集:收集2008年12月至2009年10月从化中心医院6岁以下呼吸道感染住院患儿气道分泌物标本260例。(2)采用巢式聚合酶链式反应(nested PCR)检测呼吸道分泌物hMPV感染,两轮PCR扩增产物(hMPV-1, hMPV-2)经2%琼脂糖凝胶电泳后成像并存档。(3)采用多重PCR(multiple PCR)检测呼吸道合胞病毒A、B型(RSV-A, RSV-B),流感病毒甲、乙型(Flu-A, Flu-B),副流感病毒1、2、3型(PIV-1, PIV-2, PIV-3),PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳后成像并存档。(4)随机挑选7例hMPV-1阳性PCR产物进行基因测序,测序工作由上海英骏生物技术有限公司(invitrogen)完成。(5)所有测序结果与GenBank中的序列进行比对,分析同源性;多重序列比对采用Clustal W软件;种系进化分析采用DNAStar软件。结果:(1)hMPV-1阳性PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳后成像并存档,阳性标本和阳性对照于450bp～600bp间各出现一条目的条带,与预期条带大小一致(462bp);hMPV-2阳性PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳后成像,阳性标本和阳性对照于400bp～500bp间各出现一条目的条带,与预期条带大小一致(431bp)。(2)hMPV-1男性阳性标本17例,阳性率9.83% ;女性标本4例,阳性率4.60%。男、女感染阳性率比较差异无统计学意义(χ~2=2.132,P0.05);hMPV-2男性阳性标本36例,阳性率20.81% ;女性标本12例,阳性率13.79%。男、女感染阳性率比较差异无统计学意义(χ~2=2.132,P0.05)。hMPV-2男、女感染阳性率与hMPV-1比较差异有统计学意义(χ~2=8.04, P0.05;χ~2=4.41, P0.05)。hMPV-1发病年龄中年龄6个月组阳性率7.51%;6个月年龄"f1岁组阳性率13.11%,两个年龄组比较差异无统计学意义;hMPV-2年龄6个月组阳性率13.87%;6个月年龄"f1岁组阳性率31.15%;1岁年龄"f3岁组阳性率20.83%。三个年龄组阳性率比较差异无统计学意义。hMPV-2发病年龄中1岁年龄"f3岁组阳性率与hMPV-1比较有显著性差异(χ~2=5.76, P0.05)。hMPV感染3、4月份发病率较高,春季高发,发病高峰期与RSV感染有重叠。(3)hMPV-1阳性标本21例,阳性率为8.08%;hMPV-2阳性标本48例,阳性率为18.46%。两轮扩增产物阳性率比较差异有统计学意义(χ~2=54.14, P0.05)。hMPV感染临床表现以咳嗽和喘息为主;hMPV-1感染患儿喘息症状及中性粒细胞百分比(%)与PIV-3感染比较差异有统计学意义(χ~2=4.219,P0.05;t=-2.424,P0.05)。hMPV-2中性粒细胞百分比(N%)与PIV-3比较差异有统计学意义(t = - 2.26, P0.05)。hMPV-1阳性患儿诊断为LRTI,其中毛细支气管炎12例(57.14%),支气管肺炎3例(14.29%),支气管炎6例(28.57%)。hMPV-2阳性患儿诊断包括上、下呼吸道感染。上呼吸道感染表现为喉炎1例(2.08%),下呼吸道感染表现为毛细支气管炎25例(52.08%),支气管炎14例(29.17%),支气管肺炎6例(12.5%),支气管哮喘2例(4.17%)。(4)其他常见呼吸道病毒感染检测阳性126例,阳性率为48.46%;RSV-A感染阳性标本18例,阳性率6.92%;RSV-B感染阳性标本27例,阳性率10.83%。RSV阳性标本共45例,总阳性率17.31%。临床表现以咳嗽、喘息、发热、憋气为主。临床诊断为LRTI。RSV感染春季高发;Flu-A感染阳性标本4例,阳性率1.54%;Flu-B感染阳性标本10例,阳性率3.85%;Flu阳性标本共14例,总阳性率为5.38%;临床表现以咳嗽、喘息、发热为主。临床诊断以LRTI为主,其中1例Flu-A阳性患儿诊断为喉炎,2例Flu-B阳性患儿诊断为支气管哮喘。Flu感染春季高发;PIV-3感染阳性标本67例,阳性率25.77%;未检测到PIV-1、PIV-2型感染。临床表现为咳嗽、喘息、发热、憋气、咳痰为主。临床诊断以LRTI为主,其中2例PIV-3阳性患儿诊断为喉炎。PIV-3感染春季高发;hMPV-1中其他常见病毒混合感染共19例,混合感染率15.08%。其中RSV-B/Flu-B 1例,RSV-B/PIV-3 14例,Flu-A/PIV-3 1例,Flu-B/PIV-3 3例;hMPV-2中其他常见病毒混合感染17例,混合感染率为13.49%。其中RSV-B/Flu-B 1例,RSV-B/PIV-3 12例,Flu-A/PIV-3 1例,Flu-B/PIV-3 3例;两者比较差异无统计学意义。(5)hMPV-1阳性标本中合并其他病毒感染7例,混合感染率为33.33%,其中hMPV/RSV-B 1例,hMPV/Flu-B 3例, hMPV/PIV-3 3例;未见多重感染;hMPV-2阳性标本中合并其他病毒感染17例,混合感染率为35.42%,其中hMPV/RSV-A 4例, hMPV/RSV-B 1例,hMPV/Flu-B 3例,hMPV/PIV- 3 7例。三重病毒感染hMPV/RSV-B/PIV-3 2例(11.76%)。hMPV-1与hMPV-2病毒混合感染率比较差异无统计学意义。hMPV混合感染患儿临床表现以咳嗽、喘息为主,临床诊断为LRTI。(6)hMPV-1阳性PCR产物测序结果与GenBank中序列进行比对,与序列HMPVgz01 (GenBank acession: GQ153651.1)及BJ(GenBank acession: DQ843659.1)局部相似性为98%～100%,具有同源性。多重序列比对及进化树分析表明7例测序标本基因型均为A型中A2亚型。结论:(1)从化市hMPV感染临床及分子流行病学特征:hMPV感染阳性标本48例,感染率为18.46%,感染性别及年龄组无差异。hMPV感染具有明显季节性,3、4月份发病率高,冬、春季高发。临床症状以咳嗽、喘息为主,临床诊断为下呼吸道感染,表现为毛细支气管炎、支气管肺炎、支气管炎。hMPV是引起小儿病毒性下呼吸道感染的一种重要病原体。(2)从化市hMPV合并其他病毒感染临床及流行病学特征:48例hMPV感染阳性标本中,合并其他病毒感染17例,合并感染率为35.42%。临床表现及流行病学特征与hMPV感染相似。(3)从化市hMPV感染基因测序及种系进化分析:hMPV-1测序结果与HMPVgz01(GenBank accession:GQ153651.1)及BJ1887(GenBank accession:DQ843659.1)局部相似性为98%～100%,具有同源性。种系进化分析表明7例测序标本基因型均为A型中A2亚型。(4)其他常见呼吸道病毒感染临床及分子流行病学特征:其他常见呼吸道病毒感染阳性标本126例,阳性率48.46%。PIV-3感染率最高,其次是RSV。各种病毒的临床症状与体征相似,发病季节交叉,给临床鉴别与诊断造成困难。
【图文】：

年龄,凝胶电泳,标本,成像

A B11045171063167010204060801001206月<年龄 6月<=年龄<1岁 1岁<=年龄<3岁 3岁<=年龄<5岁年龄>5岁男性女性图1 各年龄组男、女性别分布情况数（人）人年龄分组

性别分布,人年,情况,女性

各年龄组男、女性别分布情况
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R725.6

【参考文献】