幼鼠内脏痛高敏感性与结肠及中枢神经系统CGRP表达的关系

发布时间：2020-05-05 08:44

【摘要】： 目的:建立幼鼠内脏痛高敏感模型,通过检测幼鼠结肠、腰骶段脊髓背角和不同脑区(下丘脑室旁核、中缝核和前皮质扣带回)CGRP分布和表达情况,探讨脑-肠轴中CGRP异常表达在幼鼠内脏高敏感形成中的作用,深入认识小儿腹痛相关的功能性胃肠道疾病的病理生理机制,为临床采取有效防治措施和开发治疗药物提供理论依据。 方法:32只SD乳鼠按析因设计分成4组,每组8只,A1B1组:新生期予CI,6周龄时予结直肠扩张(Colorectal Distension,CRD)刺激;A1B2组:新生期予CI,6周龄时不予CRD刺激;A2B1组:新生期未接受CI,6周龄时予CRD刺激;A2B2组:新生未接受CI,6周龄时也未予CRD刺激。A1B1组和A1B2组乳鼠从出生第8天开始每天固定时间接受CI,每日1次,连续7d;A2B1组和A2B2组只与母鼠分离、捉拿而不行CI。随后将乳鼠常规饲养至6周龄进行下列研究:①CRD刺激下腹壁撤退反射(AWR)评分、痛阈测定和腹外斜肌放电波幅检测评价幼鼠内脏痛敏感性。②对结肠、L6～S2脊髓和不同脑区(下丘脑室旁核、中缝核和前皮质扣带回)进行CGRP免疫组化法染色,采用计算机图像分析系统进行CGRP阳性细胞数和灰度积分值半定量分析。③降结肠病理学检查。α=0.05为显著性检验标准。 结果:[1]幼鼠6周龄时,随CRD增加,A1B1组和A2B1组幼鼠AWR评分和腹外斜肌放电波幅均逐渐增加;CRD 20mmHg、40mmHg、60mmHg时,A1B1组AWR评分明显高于A2B1组,CRD80mmHg时,两组AWR评分无显著差异;CRD 15mmHg、30mmHg、45mmHg时,A1B1组腹外斜肌放电幅值明显高于A2B1组,CRD 60mmHg、75mmHg时,两组腹外斜肌放电幅值无显著差异;A1B1组和A2B1组大鼠痛阈值分别为14.79±3.14mmHg、37.71±5.3mmHg,差异有统计学意义(F=109.4,P0.01);降结肠未见明显病理组织损伤。[2]新生期CI和接受伤害性CRD刺激后可导致幼鼠结肠、脊髓背角和下丘脑室旁核、前扣带回皮质、中缝核内CGRP阳性细胞数明显增加,CGRP阳性细胞灰度积分值明显降低。 结论:新生期持续CI会造成幼鼠痛阈下降,出现慢性内脏高敏感性,且没有明确的组织病理学改变;幼鼠慢性内脏痛敏感性异常可能牵涉脑-肠轴的各个环节,无论是外周结肠,还是脊髓背角和前皮质扣带回、下丘脑室旁核、中缝核,CGRP均参与了内脏痛敏感性变化;新生期CI可导致神经系统发育异常和敏化,CGRP可能作为一种神经递质参与了这种病理生理改变。
【图文】：

8图 1-1 实验流程图2.1 幼鼠慢性内脏痛高敏感模型制备参照 Al-chaer 报道的方法[12]建立幼鼠内脏痛高敏感模型。A1B1组和 A1B2组乳鼠在出生后 8～15 d，每天固定时间(11:30～12:30)接受 1 次 CI。CI 方法：采用 20mm×2.5mm 人血管重建气囊，将气囊全部插入乳鼠结直肠中，插入深度约 3.0cm，快速充气扩张产生 60mmHg 压力(血压计测定)，压力维持 lmin 后排出空气再抽出气囊，每天 1 次，持续 7d。所有实验操作时间限定在 1h 内完成。A2B1组和 A2B2组每日同期只与母鼠分离、温柔捉取，抚摸其会阴部 1min 而不予以气囊充气。实验操作时间同造模组相同。CI 期间继续与母鼠同笼，鼠乳喂养；21d 后与母鼠分离，雌雄分开，每笼 8 只，，所有大鼠均采用混合配方饲料(由福建医科大学实验动物中心提供)同样饲养至 6 周，自由进食饮水，每日更换饮水、饮料，保持大鼠生活环境通风及清洁卫生；观察进食、饮水、

A1B1组和 A2B1组乳鼠在第 6 周进行内脏痛敏感性评价。2.2 幼鼠内脏痛敏感性测定A1B1组和 A2B1组大鼠 6 周龄时进行结直肠扩张刺激下内脏痛敏感性评价。采用腹部收缩反射(Abdonminal Withdrawal Reflex，AWR)评分[13]、痛阈[14]测定和腹外斜肌放电波幅值测定作为不同的扩张压力下结直肠疼痛反应指标，评估肠道痛觉敏感性。2.2.1 AWR 评分采用双盲法，由非实验者记录给予每个压力时 6 周龄幼鼠腹肌收缩反应。根据大鼠 AWR 的强度进行评分，评分标准为[13]：0 分，幼鼠对结肠扩张时无明显行为变化；1 分，结肠扩张时幼鼠身体静止不动或仅有简单的头部运动；2 分，结肠扩张时腹部肌肉开始收缩，但腹肌未抬离桌面；3 分，结肠扩张时腹肌明显收缩变平或使下腹壁抬离箱底；4 分，结肠扩张时腹壁拱起或伴身体、骨盆躬起。每个 CRD 压力进行 3 次 AWR 评分，取均值。AWR 评分标准示意图见图 1-2。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R725.7

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本文编号：2649842