维生素A在先天性肛门直肠畸形肠神经系统发育异常中的作用研究

发布时间：2020-05-13 18:24

【摘要】：第一节维生素A及维甲酸受体RARs在肛门直肠畸形患儿中的表达研究目的:检测先天性肛门直肠畸形(anorectal malformation,ARM)患儿血清维生素A(vitamin A,VA)水平及肠组织维甲酸受体(retinoic acid receptors,RARs)的表达特点,探究其与ARM患儿肠神经系统(enteric nervous system,ENS)发育异常的联系。方法:利用高效液相色谱法检测32例初诊ARM新生儿血清VA浓度,选取30例非消化道畸形新生儿血清作为对照;收集30例ARM患儿直肠末端及造瘘口横结肠组织,选取4例非消化道畸形患儿直肠组织作为对照,RT-PCR检测各组肠组织RARα、RARβ、RARγm RNA表达水平;根据患儿直肠末端病检结果将ARM患儿直肠组织分为神经节细胞发育正常组和异常组(n=6/组),免疫组织化学染色和Western blot检测两组直肠RARα蛋白的表达水平。结果:ARM新生儿血清VA平均浓度显著低于对照组(P0.01);ARM患儿直肠末端RARαm RNA相对表达量显著低于造瘘口横结肠(P0.001)和对照组直肠(P0.01),而造瘘口横结肠与对照组直肠无显著性差异(P0.05);RARβ、RARγm RNA在各组肠组织间相对表达量无统计学差异(P0.05);RARα蛋白在神经节细胞核及周围的神经纤维呈阳性表达,神经节细胞发育异常组直肠RARα蛋白表达水平显著低于正常组(P0.01)。结论:ARM患儿存在血清VA及直肠组织RARα表达异常,VA及其受体RARα可能参与了患儿ENS的发育过程。第二节RARα及NeuN在肛门直肠畸形小鼠模型直肠的表达研究目的:建立全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导的小鼠ARM动物模型,筛选最适造模条件;探究ARM小鼠直肠组织RARα和直肠神经元标记物NeuN的表达情况。方法:C57BL/6J孕鼠随机分为6组,实验组B-D:分别于孕7.5、8.5、9.5d(gestation day,GD)予以100mg/kg ATRA灌胃1次,实验组E-F:分别在GD8.5予以80、60mg/kg ATRA灌胃1次,对照组A孕鼠在GD8.5予以玉米油灌胃1次,所有孕鼠在GD18.5剖宫取出胎鼠。测量胎鼠体重、身长、尾长,分别记录活胎数和伴随畸形数。收集GD16.5-18.5胎鼠直肠组织,RT-PCR和免疫荧光动态检测胎鼠直肠RARα、NeuN表达水平。结果:各实验组与对照组比较,活胎体重减轻,身长、尾长缩短(P0.05),C组胎鼠尾长、身长显著小于D组(P0.05),C、E、F组胎鼠体重,身长,尾长均无统计学差异(P0.05)。GD8.5、9.5予以ATRA灌胃均能诱导ARM畸形;以100mg/kg ATRA处理孕鼠,B组胎鼠全部死亡,C组ARM致畸率和死胎率显著高于D组(P0.05)。GD8.5予以不同浓度ATRA处理孕鼠,E组ARM致畸率显著高于F组(P0.05),与C组无统计学差异(P0.05);E组死胎率显著低于C组(P0.05),与F组无统计学差异(P0.05)。神经管畸形(neural tube defects,NTDs)总体发生率约为10.59%,与C组相比,D、E、F组NTDs发生率降低(P0.05),而D、E、F组间无统计学差异(P0.05)。与同天数对照胎鼠相比,GD16.5-18.5ARM胎鼠直肠RARαm RNA相对表达量均显著降低(P0.05);GD16.5-18.5 ARM胎鼠直肠NeuN m RNA的相对表达量也分别低于同天数对照胎鼠直肠(P0.05)。GD16.5-18.5胎鼠直肠均有RARα和NeuN蛋白的阳性表达;RARα阳性染色主要集中在肠肌层区域,和神经元细胞核标记物NeuN的表达部位有重叠;与同天数对照胎鼠直肠相比,ARM胎鼠直肠RARα和NeuN的荧光强度均降低结论:成功建立了ATRA诱导的C57BL/6J小鼠ARM动物模型,GD8.5 80mg/kg剂量ATRA灌胃1次为适宜造模条件,致畸率可达95.2%。在ARM模型小鼠中,GD16.5-18.5胎鼠直肠神经元标志物NeuN和RARα表达水平降低,且两者表达部位有重叠,过量的ATRA可能诱导机体负反馈调节导致肠组织RARα水平下调,从而影响ARM小鼠ENS发育的过程。
【图文】：

****：P＜0.0001图 2.1ARM 新生儿和对照新生儿血清 VA 浓度Fig.2.1 Serum VAlevels in control and ARM neonates RARs mRNA 水平

不同组肠组织RARαmRNA相对表达量
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R726.5

【参考文献】

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1 罗媛圆;滕银平;刘行;李力;金先庆;;先天性肠无神经节细胞症患儿中血清维生素A及肠组织维甲酸受体α和HA117的表达特点[J];解剖学报;2015年04期

2 陈丽君;任兰;刘祖银;李廷玉;陈洁;张萱;;孕期边缘型维生素A缺乏对新生鼠RARα、Src和NMDAR1表达的影响[J];上海交通大学学报(医学版);2015年04期

3 韦荣飞;邱晓;张令强;贺福初;;肠神经系统发育调控研究进展[J];生物物理学报;2014年06期

4 陈默;苏丽莉;余永莉;朱成学;黄益玲;李啸红;刘茂生;;维甲酸致小鼠畸形最佳剂量的探索[J];毒理学杂志;2014年03期

5 韦惠琴;钟卫一;;全反式维甲酸的临床应用及研究进展[J];医学综述;2014年06期

6 朱进;金先庆;;Bcl-2、钙视网膜蛋白在发育异常肠壁神经节细胞中的表达[J];第三军医大学学报;2010年01期

7 郭海军;张兵;;国内外儿童维生素A缺乏干预研究的进展[J];卫生研究;2009年04期

8 杜勇;施诚仁;张文竹;;全反式维甲酸致大鼠胚胎肛门直肠畸形的实验研究[J];上海交通大学学报(医学版);2006年11期

9 郭俊斌,张志波,王练英,高红;维甲酸诱导大鼠肛门直肠畸形胚胎中RARmRNA表达的研究[J];中华小儿外科杂志;2005年05期

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本文编号：2662357