先天性无痛无汗症的遗传学研究

发布时间：2020-05-18 13:10

【摘要】：背景:先天性无痛无汗症(congenital insensitivity to pain with anhydrosis,CIPA)又称为遗传性感觉和自主神经病变IV型,是一种以无汗和对疼痛刺激不敏感为基本特征的罕见的常染色体隐性遗传病。患儿出生即有发育缺陷,常见不明原因高热,死亡率高。人群中该病发病率极低,临床误诊率高。近年来随着临床诊断和分子检测手段的发展,国内外不断有CIPA病例和遗传学研究被报道,但目前我国尚无CIPA大样本的遗传学研究。目的:采用成熟的基因检测平台,对中国人群CIPA家系进行致病基因突变的研究,探索中国人群CIPA患者的致病基因突变谱,为该病的分子水平诊断和遗传咨询提供依据。方法:本研究采用Sanger测序和高通量测序相结合的方法进行CIPA家系的致病突变研究。采集CIPA患者临床信息及患者与家系成员外周血样本,采用酚-氯仿法提取外周血基因组DNA,对家系中先证者NTRK1基因外显子及其邻近区域进行Sanger测序,筛查点突变和indel突变。采用长片段PCR和实时荧光定量PCR的方法检测NTRK1基因的大片段缺失。对于上述方法未找到致病突变的家系,选择全基因组测序的方法进一步对NTRK1内含子深部进行突变筛查,并针对候选致病突变在家系成员中进行突变验证。对于筛查到的内含子非经典剪接突变,采用Minigene及患者外周血mRNA分析的方法验证突变致病性。结果:通过对34个CIPA家系的遗传学研究,我们鉴定出27种NTRK1致病突变,包括新突变15种,已报道突变12种。最常见突变为c.851-33TA和c.287 + 2dupT,突变等位基因频率为35%(24/68)。此外,发现一个反复出现的Alu元件介导的染色体内非等位基因同源重组导致大片段缺失(c.428-374_718+485del);通过全基因组测序,在四个无关CIPA家系中首次鉴定出一个内含子深部突变(c.[851-794CG;851-798CT]),该突变导致 mRNA 的剪接异常。结论:在中国人群中开展较大CIPA样本的致病基因突变研究,鉴定出多个新型突变,并在NTRK1基因中,首次鉴定出内含子深部突变和Alu元件介导的大片段缺失,获得具有代表性的、较完整的NTRK1基因突变谱,有助于CIPA患者的精准诊疗。
【图文】：

－－Ｆ逡逑图２－１本研究中收集的先天性无痛无汗症家系系谱图。Ａ代表家系１？４，邋９￣１４，邋１６，邋２０？２１，２３￣２４，逡逑２６，２８，邋３０？３２和３４的系谱Wｓ邋Ｂ表示家系５的系谱圈；Ｃ表示家系８，邋１５，１７￣１９，，邋２５，邋２７，邋２９逡逑和３３的系谱图；Ｄ和Ｅ分别代表家系６和７的系谱图；Ｆ表示家系２２的系谱图。逡逑

北京协和医学院硕士研究生学位论文据Ｉｎ－Ｆｕｓｉｏｎ克隆需要设计目的片段ＰＣＲ引物，采用常规方法设计出一对２５邋ｂ的上下游引物，再根据酶切位点粘性末端类型在引物５’端加上１５邋ｂｐ邋ＰｃＡＳ２性化末端的碱基序列（图２－３），包含Ｍｗｌ和５ａｍ／／１酶切位点。应用ＰＣＲ证者ＭＴＪｉＯ基因外显子５－７附近区域基因组ＤＮＡ，具体引物信息见表２－５。逡逑「ａｐｐｅｎｄ邋ｗｉｔｈ邋ｙｏｕｆｓｐｅｄｆｉｃ邋ｓｅｑｕｅｆｖｅｅ逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R725.9

【参考文献】

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2 李伟强;郭跃明;汪启筹;马洪;郭剑;;先天性无痛无汗症并发习惯性髋关节脱位1例[J];中国骨伤;2010年05期

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本文编号：2669766