【摘要】：目的:生发基质-脑室内出血(Germinal matrix-intraventricular hemorrhage,GM-IVH)通常由于早产儿自身生发基质脉管系统的脆弱特点,再加上血流动力学及呼吸不稳定等原因,容易造成不成熟血管破裂出血,是早产儿最常见的并发症之一。出血后的血肿压迫了周围脑白质,引发颅高压、离子超载、氧自由基增多,产生一系列如炎症、脱髓鞘,细胞凋亡等病理改变,可使患儿遗留不同程度的神经系统后遗症,造成家庭及社会沉重的经济负担与心理压力。研究发现,早产儿脑白质受损后可见大量透明质酸(Hyaluronic acid,HA)聚集。在研究脱髓鞘损伤的动物实验中发现:HA可以阻碍少突胶质前体细胞(Oligodendrocyte precursor cells,OPCs)发育成熟和脑白质髓鞘形成。目前已知,GM-IVH可诱导脑室周围白质产生炎症反应和HA聚集,我们推测HA也可能参与GM-IVH后OPCs发育受阻,阻碍脑白质髓鞘形成。透明质酸酶(Hyaluronidase,HAase)可以分解HA,对发生GM-IVH的早产儿,应用脑内注射HAase降解HA,能否达到减轻HA对脑组织OPCs发育的阻碍作用,继而减轻患者脑白质髓鞘形成障碍?关于这方面的研究国内外少有报道。本实验通过早产兔获取GM-IVH动物模型,给予GM-IVH的动物脑内注射HAase,作为HAase治疗组,并设置对照组,即模型组。观测两个不同指标:(1)神经胶质抗原2(Neuron-glial antigen2,NG2),该指标反应OPCs的发育成熟情况;(2)髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP):反应CNS髓鞘脱失的特异性指标。该实验目的是观察HAase治疗能否改善GM-IVH早产兔脑组织OPC发育受阻,减轻脑室周围脑白质的髓鞘脱失,达到神经保护作用,为临床治疗早产儿GM-IVH提供新思路。方法:1.制备早产兔GM-IVH动物模型:新西兰兔的正常怀孕时间为32天,选择健康孕29天的新西兰大白兔剖宫产,出生的兔子为早产兔。实验共用早产兔80只,体重在30~55g之间,生后给予暖箱保温、早产儿奶粉喂养,将获取的早产兔随机分成正常组、模型组(单纯GM-IVH模型)、治疗组(GM-IVH模型+HAase治疗)三个组别。在生后3小时内,出血组(即模型组和治疗组)的早产兔接受50%的丙三醇注射,注射方式为腹腔注射,剂量为10ml/Kg,目的为诱导早产兔发生GM-IVH。正常组不给予任何处理。所有动物实验操作流程均遵循国际动物委员会制订的伦理道德规范执行。2.出血的确立及治疗:(1)1天后所有早产兔接受头颅超声检查,验证早产兔颅内出血的发生请况。(2)治疗组早产兔侧脑室注射HAase:在超声指引下,在生后第2天、4天和第6天,治疗组早产兔接受经前囟侧脑室注射HAase,剂量为20ul/kg。(3)模型组按上述方法向侧脑室注射同等剂量的生理盐水,正常组不给予任何处理。3.提取脑组织:将正常组、模型组、HAase治疗组三组早产兔分别在生后第3天、7天、14天随机处死,迅速取出脑组织,获得的脑组织一部分放入-80℃冰箱中保存,供蛋白印迹实验使用。其余脑组织置于4%多聚甲醛中固定,进行免疫组化染色和苏木精-伊红染色。4.应用免疫组化法观察三组标本中不同时间点NG2的表达情况。5.应用蛋白印迹实验对比三组标本中不同时间点MBP的表达情况。6.数据分析:应用SPSS19.0统计学软件、Microsoft Excel 2003软件对数据进行处理,数据符合计量资料时用均数±标准差表示,组间比较采用LSD检验;若数据不满足方差齐性检验则采用秩和检验(rank-sum test)的方法。检验标准设为0.05,P值0.05有统计学意义。结果:1成功复制GM-IVH动物模型颅脑超声检查结果:模型组30只,未出血有5只,实验期间死亡4只,实际参与实验有21只;治疗组29只,未出血3只,实验期间死亡5只,实际参与实验有21只;正常组21只均未出血,实验期间未发生死亡,实际参与实验有21只。脑组织HE染色结果:诱导GM-IVH成功的早产兔,在光学显微镜下观察脑组织可见:脑室周围大量红细胞及炎性细胞浸润,未出血组无明显变化,证实早产兔GM-IVH模型制备成功。2早产兔脑组织NG2表达本实验发现各组早产兔在脑室周围脑白质区均可见NG2细胞表达。随着时间推移,正常组早产兔脑组织中NG2表达量逐渐降低,三个时间点两两比较,在生后3天与生后7天、生后14天比较,差异具有统计学意义(P0.05),生后7天与生后14天比较,差异无统计学意义(P0.05);模型组和HAase治疗组的早产兔脑组织中NG2表达量逐渐降低,三个时间点两两比较,差异具有统计学意义(P0.05);同一时间点比较,在生后3天与生后14天,NG2细胞表达量:HAase治疗组正常组模型组,生后7天NG2细胞表达量略有不同,由大到小依次排序为HAase治疗组模型组正常组,无论在生后3天、7天还是14天,任何一个时间段三组两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。3早产兔脑组织MBP表达各组新生早产兔在脑出血周围脑白质区均可见MBP阳性表达。三组早产兔MBP蛋白的表达量随着日龄的增加而增加,方差分析具有统计学意义(P0.05)。正常组和HAase治疗组MBP的的表达量在生后3天、7天、14天三个时间点两两比较,差异具有明显统计学意义(P0.05);在生后14天时,HAase治疗组MBP的的表达量高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。模型组早产兔MBP的表达量在生后14天与生后3天、7天比较,差异具有统计学意义(P0.05),但生后3天与生后7天比较,两组差异无统计学意义(P0.05)。在同一时间点,MBP的的表达量为HAase治疗组模型组,方差分析有统计学意义(P0.05)。结论:早产兔GM-IVH后,脑组织中NG2、MBP表达量降低,提示GM-IVH阻碍OPCs发育和脑白质髓鞘形成;经侧脑室给予注射透明质酸酶后,HAase治疗组NG2、MBP表达量高于模型组,提示经透明质酸酶治疗后有利于少突胶质前体细胞发育和髓鞘形成。
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R722.6
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 洛云悠;李林深;;有了透明质酸酶 注射美容就绝对安全了吗?[J];医学美学美容(Me);2017年08期
2 李廷坤,丁彦杰,王春亭,董铁立,谷红;透明质酸酶用于治疗肌筋膜疼痛综合征[J];实用疼痛学杂志;2005年04期
3 张翠艳,赫捷;透明质酸酶1的研究进展[J];中华医学杂志;2004年05期
4 李顺意,梁宋平;透明质酸酶研究进展[J];国外医学(分子生物学分册);1995年02期
5 肖锡红;;蜂毒的主要成份及其功能[J];养蜂科技;1991年03期
6 蒋汉苏;透明质酸酶注射配合推拿治疗肩周炎疗效观察[J];第一军医大学学报;1989年01期
7 徐深;利多卡因、肾上腺素联合透明质酸酶用于老年性白内障手术球后麻醉[J];国外医学.眼科学分册;1989年04期
8 周作民;沙家豪;张适;;精子透明质酸酶的底物膜显示法[J];南京医学院学报;1989年04期
9 吴福同;杨威斌;;透明质酸酶治疗肌肉僵化、硬结疗效观察[J];浙江体育科学;1989年01期
10 程明哲，苏拔贤，吴青，梁红晖;虾头透明质酸酶的研究[J];热带海洋;1995年03期
相关会议论文 前9条
1 周纯;吴德义;;透明质酸酶治疗球后血肿[A];2006年浙江省眼科学术会议论文集[C];2006年
2 李培旭;李尚为;彭芝兰;马黔红;黄仲英;李蕾;唐宗蓉;韩字研;;透明质酸酶在人睾丸成熟精子分离中的应用初探[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年
3 王晓玉;刘飞;张莉;朱希强;凌沛学;张天民;;重组人透明质酸酶3种活性测定方法的比较[A];山东省药学会2010年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2010年
4 李廷坤;王春亭;董铁立;;透明质酸酶用于肌筋膜疼痛综合征治疗的临床观察[A];中华医学会疼痛学分会第六届年会论文摘要[C];2005年
5 冯驰;许杰;;雌激素与透明质酸酶对特发性髁突吸收发生机制的研究[A];第十四次中国口腔颌面外科学术会议论文汇编[C];2018年
6 吴娜娜;陈杨林;吴宝江;李慧鹏;蔚梦怡;包斯琴;;添加2i/lif、Y27632和透明质酸酶对牛体外胚胎发育的影响[A];2017年第十五届中国北方实验动物科技年会论文集[C];2017年
7 么宏强;张月梅;朱福余;于立新;马学恩;;绵羊透明质酸酶-2基因克隆载体的构建及生物信息学分析[A];2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集[C];2012年
8 刘飞;朱希强;郭学平;凌沛学;;兽疫链球菌透明质酸酶在大肠杆菌中的高效表达和酶学性质[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年
9 崔虎山;;透明质酸酶在急性嵌顿性环状混合痔早期手术治疗中的应用体会[A];第十一次全国中西医结合大肠肛门病学术会议论文汇编[C];2006年
相关重要报纸文章 前4条
1 陆志城;透明质酸酶注射液[N];医药经济报;2005年
2 陆志城;透明质酸酶注射液：促进注射药物吸收[N];医药经济报;2006年
3 李凡 译;联用重组透明质酸酶可加快胰岛素吸收[N];中国医药报;2010年
4 ;食出细腻的肌肤[N];甘肃经济日报;2001年
相关博士学位论文 前7条
1 刘珊;重组长效透明质酸酶的构建及其在皮下给药与肿瘤治疗中的应用研究[D];中国科学院研究生院(过程工程研究所);2016年
2 李儒仁;牦牛睾丸透明质酸酶分离纯化、酶学性质及其降解透明质酸的机理[D];甘肃农业大学;2015年
3 金鹏;透明质酸寡聚糖生物合成与DNA编辑组装工具构建[D];江南大学;2016年
4 谢华飞;基于聚集诱导发光效应的荧光传感体系的制备和应用研究[D];华南理工大学;2015年
5 胡清华;几种有机荧光传感器的合成及其在内源性生物酶和硫醇检测中的应用研究[D];华南理工大学;2016年
6 安输;两种节肢动物过敏原的分离纯化及结构与功能研究[D];中国科学技术大学;2012年
7 沈立荣;中华蜜蜂、意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A_2和透明质酸酶基因的克隆与表达[D];浙江大学;2002年
相关硕士学位论文 前10条
1 梁如佳;透明质酸酶对早产兔GM-IVH后NG2和MBP表达的影响[D];承德医学院;2018年
2 李治;透明质酸酶治疗早产兔生发基质—脑室内出血的实验研究[D];河北医科大学;2017年
3 姜廷;重组人透明质酸酶药效学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2017年
4 李彦韬;CHO细胞表达的人透明质酸酶结构与功能研究[D];第二军医大学;2016年
5 李廷坤;透明质酸酶和曲安奈德局部用药对软组织损伤性粘连的影响[D];郑州大学;2006年
6 冯志臣;地榆抗过敏活性物质的研究[D];广西大学;2007年
7 李洪锐;利用拟南芥和红花油体系统表达透明质酸酶hPH20的研究[D];吉林农业大学;2014年
8 陈怡斐;重组透明质酸酶的表达、纯化及其酶学性质研究[D];上海应用技术学院;2016年
9 薛蔚;产透明质酸酶菌株的筛选及发酵条件的优化[D];山东大学;2015年
10 崔静雯;尼罗罗非鱼无乳链球菌脑膜炎病理损伤的动态研究及无乳链球菌透明质酸酶多克隆抗体制备[D];四川农业大学;2015年
，
本文编号：
2673317
