糖皮质激素和沐舒坦产前应用对大鼠肺发育影响的研究

发布时间：2020-05-27 03:03

【摘要】：新生儿呼吸窘迫综合征(neonatal respiratory distress syndrome, NRDS)是导致早产儿早期死亡的重要原因。因而积极防治NRDS的发生是产儿科大夫关注的热点。目前临床上主要采用糖皮质激素对有早产高危因素的孕晚期孕妇进行预防性治疗，获得良好疗效，极大地降低了NRDS发病率与早产儿死亡率。然而，糖皮质激素的副作用受到产儿科临床的关注，国内外大量文献证实，大剂量、多疗程糖皮质激素的应用对母婴均是弊大于利。盐酸氨溴索（又名沐舒坦）是临床常用的快速排痰药，同时具有与糖皮质激素相似的作用，能有效促进胎肺中肺泡II型上皮细胞的发育，增加肺泡表面活性物质的合成与分泌，从而降低NRDS的发生率和早产儿死亡率。沐舒坦有可能成为替代糖皮质激素成为产前促胎肺成熟的临床用药。现已知胚胎肺脏发育受多种激素、细胞因子调节，涉及多条信号通路。Toll样受体4(toll-like receptor 4, TLR4)是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体，在炎症、细胞信号转导、细胞凋亡、细胞增殖及肿瘤等发生过程中扮演重要角色。NF-κB是一族调控组织（包括胚胎四肢、肝脏、皮肤、骨骼以及肺）和淋巴细胞生长、分化和凋亡的转录因子。研究两者与肺脏发育的关系日益受到关注。因此本文第一部分的研究从大鼠胎（仔）肺形态发育角度探讨了产前给药沐舒坦加小剂量地塞米松联合用药以及小剂量地塞米松单独用药对大鼠胎（仔）肺发育的不同影响。第二部分研究进一步从分子水平评价产前给药沐舒坦、地塞米松对大鼠肺TLR4、NF-κB表达的影响。本文从发育生物学角度评价沐舒坦、小剂量地塞米松对肺形态发育的作用，所获沐舒坦及小剂量地塞米松对大鼠胎（仔）肺TLR4、NF-κB表达影响将为其产前预防性治疗NRDS提供新的理论依据。第一部分地塞米松和沐舒坦产前应用对大鼠肺结构发育影响的对比研究【摘要】目的：比较产前单次应用小剂量地塞米松与联合应用地塞米松加盐酸氨溴索（沐舒坦）对胎鼠及仔鼠肺形态发育的影响。方法：54只孕鼠随机分3组：地塞米松组（干预组1），地塞米松加沐舒坦组（干预组2）和生理盐水对照组。妊娠第17天，腹腔注射给药，干预组1予地塞米松0.2mg/(kg·d)，干预组2予地塞米松0.2mg/(kg·d)加沐舒坦100mg/(kg·d)，对照组予等体积生理盐水。分别在妊娠第19天，生后3天、7天取胎（仔）鼠肺组织，通过光镜和电镜技术，观察大鼠肺发育不同阶段结构形态差异。结果：1)光镜下：孕19天，干预组1和2胎鼠肺每视野平均原始肺泡计数均大于对照组(P0.05)，肺泡腔面积均大于对照组(P0.01)，，肺泡间隔厚度均小于对照组(P10.05, P20.01)，但两个干预组之间无显著差异(P0.05)。生后3天，干预组2仔鼠肺每视野平均囊泡表面积大于对照组(P0.05)，囊泡间隔厚度小于对照组(P0.05)，囊泡计数与对照组无显著差异(P0.05)；干预组1各项较对照组均无显著差异(P0.05)。生后7天，干预组2仔鼠肺每视野平均肺泡表面积大于对照组(P0.05)，肺泡间隔厚度小于对照组(P0.05)，肺泡计数与对照组无显著差异(P0.05)；干预组1各项较对照组均无显著差异(P0.05)。2)透射电镜观察：两个干预组孕19天胎鼠肺II型肺泡上皮细胞绒毛发育均较对照组密集完整，可见板层小体，对照组少见板层小体。生后3天及7天三组的仔鼠肺均可见大量板层小体，但干预组2较其他两组板层小体染色深、致密，且可见大量线粒体等发达细胞器。结论：地塞米松产前单次用药，可以促进大鼠胎肺成熟，但对其生后一段时期的肺发育未产生显著影响。小剂量地塞米松加沐舒坦产前单次用药，不仅能促进大鼠胎肺成熟，也可促进其生后一段时期的肺发育。第二部分地塞米松和沐舒坦产前应用对胎鼠及子代鼠肺TLR4、NF-κB表达影响的对比研究【摘要】目的：比较产前单次应用小剂量地塞米松与联合应用地塞米松加盐酸氨溴索（沐舒坦）对胎鼠及仔鼠肺TLR4（Toll样受体4），NF-κB基因表达的影响。方法：54只孕鼠随机分3组：地塞米松组（干预组1），地塞米松加沐舒坦组（干预组2）和生理盐水对照组。妊娠第17天，腹腔注射给药，干预组1予地塞米松0.2mg/(kg·d)，干预组2予地塞米松0.2mg/(kg·d)加沐舒坦100mg/(kg·d)，对照组予等体积生理盐水。分别在妊娠第19天，生后3天、7天取胎（仔）鼠肺组织，通过RT-PCR、免疫组化和Western blotting技术检测各组胎（仔）肺组织中TLR4、NF-κB基因转录水平及蛋白表达差异。结果：1)孕19天，两干预组与对照组相比，TLR4 mRNA在胎鼠肺中表达均明显增加分别(P10.05, P20.01)。生后3天和7天，干预组2与对照组相比，TLR4mRNA分别在两个时间点的仔鼠肺中表达均明显增加(P0.05)，但干预组1与对照组相比无显著差异(P0.05)。免疫组化和Western blotting结果显示：孕19天，与对照组相比，两干预组TLR4蛋白表达量均显著增加分别(P10.05,P20.01)。生后3天和7天，与对照组相比，干预组2 TLR4蛋白表达量均显著增加(P0.05)，干预组1无显著变化(P0.05)。 2)孕19天，与对照组相比，两干预组NF-κBmRNA表达均显著增加分别(P10.05, P20.01)。生后3天和7天，与对照组相比，干预组2 NF-κBmRNA表达均显著增加(P0.05)，干预组1无显著差异(P0.05)。Western blotting结果显示：孕19天，两干预组较对照组NF-κB蛋白表达量均显著增加分别(P10.05,P20.01)。生后3天和7天，干预组2较对照组NF-κB蛋白表达量均显著增加(P0.05)，干预组1较对照组无显著变化(P0.05)。结论：小剂量地塞米松可能参与调控大鼠胎肺中TLR4、NF-κB表达的上调，这可能是GC促胎肺成熟的重要机制之一，小剂量地塞米松联合沐舒坦产前应用可能不仅参与调控大鼠胎肺中TLR4、NF-κB表达的上调，也上调生后大鼠肺中TLR4、NF-κB表达。
【图文】：

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南京医科大学硕士学位论文结果光镜观察各组从孕 19 天到生后 7 天，肺泡逐渐变大，肺泡间隔变薄，肺泡数增多。在孕 19 天，两组干预组肺泡较对照组均明显增大，肺泡间隔变薄，肺泡数增多。生后第 3 和 7 天，干预组 1 与对照组相比无明显改变，干预组 2 则可见肺泡较对照组大，肺泡间隔薄，但肺泡数相差不大（图 1- 图 3）。

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在孕 19 天，两组干预组肺泡较对照组均明显增大，肺泡间隔变薄，肺泡数增多。生后第 3 和 7 天，干预组 1 与对照组相比无明显改变，干预组 2 则可见肺泡较对照组大，肺泡间隔薄，但肺泡数相差不大（图 1- 图 3）。对照组干预组 1 干预组 2图 1 孕 19 天大鼠胎肺光镜检测（H E, ×2 00 ） Fi g 1 Th e ob s e r va ti o n of em b r yo s 1 9 da ys r at lu n g ti s s u e in th r ee gr ou ps un d e r mi cr os c op e （H E, × 2 00 ）
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R725.6

【参考文献】