母源性微嵌合体与胆道闭锁发病机制的相关性研究

发布时间：2020-06-02 04:59

【摘要】：目的 妊娠期为了保证胚胎不受母体排斥,孕妇的免疫活性受到抑制,这使得母亲与胎儿的双向细胞交换成为微嵌合体形成的最主要机制。妊娠后母体内的微嵌合体引起多种自身免疫病的证据已经较为确凿,同时有研究发现微嵌合体可引发免疫缺陷患儿的胆道闭锁样表现,本研究探讨了胆道闭锁发病机制与母源性微嵌合体的相关性。 方法 选取石蜡包埋肝脏组织20例,每例连续4μm切片6张。在光学显微镜下观察HE染色切片,选定靶区域。5张切片间隔0.5min梯度酶消化2-4mins。DAPI浸染充分后,在荧光显微镜下观察每张切片靶区域的整体消化程度,按理想时间消化第6张切片并加探针变性杂交,洗涤后观察荧光信号并计数,初步建立石蜡包埋组织荧光原位杂交的理想消化时间及杂交信号的判读方法。在12例胆道闭锁和8例婴儿肝炎综合征、2例胆总管扩张症的男性肝脏组织石蜡切片中,采用荧光原位杂交染色体计数探针,荧光标记细胞中的X、Y染色体,计数细胞核中2条X染色体的母体细胞。 结果 通过镜下所见是判断石蜡包埋组织FISH理想消化时间的有效方法:在荧光显微镜DAPI通道见蓝色细胞核完整均一,离散良好,FITC通道见绿色细胞核边线完整、轮廓清晰时达到FISH理想消化时间,杂交可获满意荧光信号;异质性组织切片需依据靶区域整体消化程度判断理想时间;选择荧光信号清晰可辨、DAPI染色均一、边缘清楚的独立细胞进行分析。在12例胆道闭锁肝脏组织切片中均可发现母体细胞,在10例对照组肝脏组织切片中也可发现母体细胞;在肝脏组织切片的30个可读视野中,病例组和对照组母体细胞的数量分别是11±2.59和1.8±1.69(P0.01),差异有显著统计学意义。 结论 胆道闭锁肝脏组织中母源性微嵌合体的数量显著高于其他新生儿肝病,母源性微嵌合体可能与胆道闭锁的发病机制相关。
【图文】：

图 1A-B 观察单个细胞：消化未过度时，完整的细胞核（图 A 黄→）绿色边缘线连续（图 B 黄→）；开始出现消化过度，可见黑洞样残缺（图 A 红→）、绿色边缘线不连续（图 B 红→）；随着消化过度加重，黑洞样残缺加大（图A 白→）、绿色边缘线不连续加重（图 B 白→）。

图 3 消化过度的切片，前者（图 ACE）过度程度较后者（图 BDF）为轻。整体可见视野模糊，，细胞核轮廓不清，核间质渣样，过度较重整个视野呈现渣样（图 B），残缺细胞核的比例增多（图 C，D）。未过度的细胞核完整清晰（红→）（图 C，D）, 绿色边线完整（红→）（图 E，F）；消化过度的细胞核出现不同程度的黑洞样残缺（绿→）
【学位授予单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R726.5

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本文编号：2692643