HPLC法测定癫痫患儿血清中左乙拉西坦药物浓度

发布时间：2020-06-15 16:30

【摘要】：目的癫痫是一种发病率及死亡率均较高的神经系统慢性疾病,目前治疗癫痫的主要手段仍然是服用抗癫痫药物,传统抗癫痫药物的临床效应-浓度关系已经建立。左乙拉西坦(Levetiracetam ,LEV)是一种新型的抗癫痫药物,已经在一些研究中得到证实其体内代谢个体差异较大,治疗窗较窄,血浆浓度-效应关系有较好的对应关系,因此进行血药浓度监测,可用于临床及时调整给药剂量,预防药物蓄积过量,同时可反映患者的依从性情况。本实验目的在于建立操作简便、高效、特异、灵敏性、稳定,精密测定癫痫患儿血清中左乙拉西坦药物浓度的高效液相色谱(HPLC)方法。方法以α-溴苯乙酮(α-phenacyl bromide,α-BT)为内标,用乙酸乙脂从血清中按液液萃取法提取左乙拉西坦和内标,经N2恒流吹干富集浓缩,流动相定溶后20μL进样,0.4%磷酸-乙腈(92:8,V/V)为流动相,流速:1.0ml.min-1,以RP-C18色谱分析柱(150mm×3.9mm,5μm),在210nm波长处测定,以LEV与内标的峰面积比值并拟合浓度工作曲线。结果左乙拉西坦和内标峰面积比与左乙拉西坦浓度在0.234～60.00μg/mL的浓度范围内线性关系良好,y=0.06514x-0.0047,r= 0.9995,最低定量限为0.234μg/mL( S/N=4.8) ,方法平均绝对回收率为(89.18±3.57)%,日间和日内精密度变异RSD分别为(5.84±2.15)%和(5.48±2.61)%,冻融稳定性RSD5%,该方法能完全分离临床可能合并所用药物的干扰(分离度R均大于1.5),采用单盲法对方法学质量控制结果RSD4%。结论该方法具有操作简便、高效、特异、灵敏性、稳定,精密度好,回收率高,经方法学验证符合血清样品的测定要求,可用于临床血药浓度测定和药代动力学研究。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R742.1;R96
【图文】：

HPLC色谱,色谱条件,柱效,色谱行为

酮在210nm波长处有特征吸收峰，经反复试验比较显示210nm处的信号响应良，选择210nm为检测波长。.3 色谱行为经多次试验优化色谱条件为：RP-C18柱（岛津 150mm×3.9mm,5μm），检测波210nm，柱温35℃，进样量20μL；流动相0.4%磷酸-乙腈（92：8，v/v），用前超脱气（30min），流速1.0mL/min，α-BT为内标。在该色谱条件条件下，分取α-BT、EV的储备液适量，适量稀释后进样，结果LEV与IS的色谱峰分离良好（分离度>1.5），达到基线分离，峰形尖锐，无拖尾、肩峰现象（图1—A），血清内源性物无干扰(图1-C)，柱效以LEV计不小于5000，保留时间tRLEV：4.01min、IS：11min。1-A1 2 3 4 5 6 71-C

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