WT1基因表达与突变在儿童急性髓细胞白血病预后中的意义

发布时间：2020-06-17 03:03

【摘要】：一、WT1基因及其异构体在儿童急性髓系白血病中表达及临床意义 目的: 探讨急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia, AML)患儿原代骨髓细胞中WT1(wilms’tumor gene 1)及WT1(+17AA)剪接异构体表达的临床意义。 方法: 利用实时定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction method RQ-RT-PCR)检测112例/次AML患儿不同阶段原代骨髓细胞中WT1及WT1(+17AA)剪接异构体的表达水平,计算WT1(+17AA)/WT1比值,并与同期30例非白血病患儿对照。 结果: 初诊组AML患儿WT1及WT1(+17AA)剪接异构体表达明显高于缓解后患儿及非白血病对照组(P0.05);复发组AML患儿WT1及WT1(+17AA)剪接异构体表达接近初诊组及耐药组,组间比较无显著性差异。WT1(+17AA)/WT1比值缓解后患儿明显低于初诊组、复发组及耐药组(P0.05)。动态监测3例表达WT1基因的初诊AML患儿WT1及WT1(+17AA)剪接异构体,结果显示:临床耐药或复发AML患儿,其WT1、WT1(+17AA)及WT1(+17AA)/WT1比值呈持续高表达,或一过性下降后再度升高。 结论: WT1及WT1(+17AA)剪接异构体的表达及动态变化可作为急性髓系白血病判断预后及临床治疗疗效指标。 二、WT1基因突变与儿童急性髓细胞白血病的相关性研究 目的: 探讨WT1基因突变的发生率和突变类型与儿童急性髓系白血病预后的关系。 方法: 使用PCR-DNA测序技术对47例初诊AML患者骨髓或外周静脉血中WT1基因的外显子7进行测序分析,检测其是否有突变。对WT1外显子7框移突变患者进行同源建模,分子动力学优化模拟空间构型,试图阐述WT1基因框移突变对WT1蛋白功能的影响,并与儿童AML的转归进行相关性分析。 结果: ⑴在19例AML患儿中发现编码434位氨基酸的第二个碱基(A→G,G/A)存在同义突变(R434R,R为精氨酸),检出率为40.4%(19/47),比对NCBI上的SNP库,证实是一个单核苷酸多态性(SNP)位点。 ⑵3例存在框码移位,检出率为6.3%(3/47),具体如下: Case1:MDS-AML患儿中发现c.[ 1319delG],产生框移突变,已有文献报道。模拟空间构型示外显子7结构域发生明显变化。 2名原发耐药患儿, 1名患者突变位点为c.[1342delA;1349-1350insA; 1353delG;1355-1356insG;1392delA;1400-1401insT;1405delT];c.[1415-1416insC];c.[1431delG];c.[1433-1434insA],另1名患者突变位点为c.[1345delT;1349-1350insA; 1353delG; 1355-1356insG; 1392delA]。目前没有发现相关文献报道,提示新的突变位点。模拟空间构型示外显子7结构域未发生明显变化。 结论: ⑴AML存在WT1基因突变,与其预后相关。 ⑵WT1基因外显子7同义突变(c. 1303 AG)与急性髓系白血病预后无明显相关性,而WT1基因外显子7框移突变与MDS的恶性转化和儿童AML耐药相关。 (3) WT1基因外显子7框移突变可能是通过影响WT1蛋白结构,最终影响与WT1自身或其它蛋白之间相互作用,影响细胞的生物学活性,使其发生恶性转化或耐药。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R733.71
【图文】：

箭头指示为 Marker 500bp；1、2、3 为 WT1 第 7 外显子突7、8 为 WT1 第 7 外显子突变阴性 AML 患儿标本NA 测序结果型 WT1 基因外显子 7 测序结果（见图 2）列：1295-GAT GTG CGA CGT GTG CCT GGA GTA GCC CCGGCA TCT GAG ACC AGT GAG AAA CGC CCC TTC ATGTGC AAT AAG AGA TAT TTT AAG CTG TCC CAC TTAAAG CAC ACT G-1445序列：431-D V R R V P G V A P T L V R S A S E T SP G C N K R Y F K L S H L Q Met H S R K H

图 2⑵WT1 基因外显子 7 异常测序结果（见图 3）②Case1 患者 1319 号碱基缺失 G 发生框移突变，即 c.[ 1319delG]，反向测序一般资料：女，3 岁，经骨穿确诊为骨髓增生异常综合征，半年后转化为急性白血病 M1 型，初诊白细胞数：19.9×109/L,染色体：45，XX,-7,19p+[17]/46,DAE 化疗后骨穿结果示缓解，现继续巩固治疗中。

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本文编号：2716979