垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

发布时间：2020-06-21 17:31

【摘要】： 目的探讨PACAP对HIBD的保护作用及有效剂量,以期为临床治疗新生儿HIE提供有效的方法和途径。方法 1.制备HIBD模型将60只新生7日龄SD大鼠随机分为假手术(sham)组、缺氧缺血(HI)对照组和PACAP治疗组,PACAP治疗组按给药剂量分为3个小组:PACAP-H(10~(-8)mol)、PACAP-M(10~(-9)mol)和PACAP-L(10~(-12)mol)。新生大鼠行颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧(8%O_2,92%N_2)处理2小时,制成HIBD模型,sham组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不低氧处理。其余两组于HI前15min于侧脑室注射生理盐水或PACAP。所有新生鼠于HI后24h处死。 2.行为能力检查分别于手术前及缺氧后1小时对每只新生大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。 3.脑大体形态检查处死时观察每只新生大鼠脑组织的大体形态。 4.SOD、MDA、caspase-3基因表达及XIAP基因表达测定以新生鼠HIBD后24h损伤侧脑组织为标本,应用黄嘌吟氧化酶法测定SOD,应用改良的硫代巴比妥酸法测定MDA,应用荧光定量RT-PCR检测caspase-3mRNA和XIAPmRNA的表达。结果 1.行为为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定,60只全部正常。术后Sham组测定结果同前。HI对照组和PACAP治疗组的共48只大鼠,12只不能翻身,18只出现夹尾左旋,还有18只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。 2.脑大体检查新生大鼠HIBD后HI对照组结扎侧半球脑组织受损严重,在24h时苍白、水肿明显,体积明显大于对侧,PACAP治疗组大鼠未见上述改变或仅见结扎侧脑半球轻微的水肿;sham组大鼠大脑半球左右对称,未见任何病理变化。 3.SOD及MDA表达检测结果HIBD后24h,HI对照组MDA比sham组显著增高(p0.01),HI对照组SOD比sham组显著降低(p0.01);PACAP治疗组各剂量组MDA比HI对照组均显著减少(p0.01),PACAP治疗组各剂量组SOD比HI对照组均显著回升(p0.01)。 4.caspase-3mRNA及XIAPmRNA表达检测结果HIBD后24h,HI对照组caspase-3mRNA的表达和XIAPmRNA的表达均比sham组显著增高(p0.01);PACAP治疗组各剂量组caspase-3mRNA的表达均比HI对照组显著减少(p0.01);PACAP治疗组各剂量组XIAPmRNA的表达均比HI对照组显著增加(p0.01)。结论 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。 2.SOD、MDA、caspase-3及XIAP参与HIBD的发病机制:新生大鼠HIBD后MDA表达增高,SOD活力降低,证实存在自由基的损伤;caspase-3mRNA升高;证实存在细胞凋亡;XIAPmRNA升高,证实存着抗细胞凋亡的自身调节。 3.PACAP可能通过增加SOD,抑制MDA,上调XIAP,抑制caspase-3,减轻细胞凋亡而对HIBD发挥保护作用,且在高剂量(10~(-8)mol)、中剂量(10~(-9)mol)和低剂量(10~(-12)mol)时均有效。为PACAP临床治疗新生儿HIE提供了理论依据。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R722.121
【图文】：

琼脂糖凝胶电泳,显色强度,总RNA提取,蛋白

图3总RNA琼脂糖凝胶电泳注:总RNA中的285和185两条带浓度较高，位置正确，其EB的显色强度为2:1左右，RNA完整。OD260/280在1.9一2.0之间，表明总RNA中没有蛋白污染。总RNA提取结果优。

琼脂糖凝胶电泳,对照组,产物,电泳带

图4琼脂糖凝胶电泳结果注:nLZ000Ma众e:6条电泳带由上往下依次为Z000bp、一ooobp、750bp、soobp、250bp、loobp;p一aetin产物长度为Z17bp;样本产物长度为176bp，与p一aetin相当，均在250bp与loobp之lb]。4.3easpase一3pCR结果sham组相t匕(1.00肚0.144)，Hl对照组caspase一3的相对士0.599)有明显的升高(P<0.001)，而各剂量PACAP治疗组(1.318士0.342，5.544士0.553)与Hl对照组分别t匕较均有明显的降低(P<0.12、表2及图13。D.的a而扮Cyel.--一一丫一‘勺一;;{L缨俨吧一一﨏

【参考文献】