KIF3A基因与哮喘气道炎症及气道上皮细胞凋亡的相关性研究

发布时间：2020-06-22 00:18

【摘要】：第一部分KIF3A在儿童哮喘中的表达及与气道炎症的相关性研究目的KIF3A基因与哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎等免疫系统疾病密切相关,且KIF3A缺乏时可以加重哮喘小鼠的气道高反应(Airway hyperresponsiveness,AHR)及促进Th2介导的炎症反应。本研究拟探讨KIF3A基因在儿童哮喘患者中表达水平及分析KIF3A表达水平与气道炎症的相关性。方法1.选取重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心住院的哮喘儿童(Asthma组,25例)及同期同年龄段体检中心体检的健康儿童作为研究对象(Normal组,25例),2组患儿空腹抽取静脉血4ml及无菌毛刷取鼻腔粘膜细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测2组儿童外周血细胞及鼻腔粘膜细胞中KIF3A m RNA的水平。2.选取25例哮喘急性发作期轻度儿童(Mild组)及25例哮喘急性发作期重度儿童(Severe组)作为研究对象,取其鼻腔粘膜细胞及外周血,q RT-PCR检测外周血细胞及鼻腔粘膜细胞中KIF3A m RNA水平,同时检测2组儿童血清IL-4、IL-5、IL-13及总Ig E水平,并分析KIF3A表达与血清IL-4、IL-5、IL-13及总Ig E水平相关性。结果1.外周血细胞中KIF3A表达情况,Asthma组KIF3A m RNA水平明显低于Normal组(P0.05),鼻腔粘膜细胞中KIF3A m RNA水平Asthma组显著低于Normal组(P0.05);2.Severe组儿童外周血细胞中KIF3A m RNA水平低于Mild组儿童,差异有统计学意义(P0.05),鼻腔粘膜细胞中KIF3A m RNA水平Severe组显著低于Mild组(P0.05)。血清总Ig E及IL-4、IL-5、IL-13检测结果显示,Severe组明显高于Mild组,差异有统计学意义(P0.05);3.KIF3A与血清总Ig E、IL-4、IL-5、IL-13相关性分析发现,KIF3A表达水平与IL-4、IL-5、IL-13及血清总I g E水平呈负相关。结论1.KIF3A在哮喘儿童外周血及鼻腔粘膜细胞中表达下降;2.KIF3A在哮喘儿童中表达水平越低,哮喘儿童气道炎症越重。第二部分KIF3A基因与气道炎症及气道上皮细胞凋亡的相关性研究目的通过第一部分的研究我们发现KIF3A基因在哮喘儿童中低表达,且KIF3A表达水平与气道炎症密切相关。气道炎症及气道上皮细胞异常凋亡在哮喘发病机制中起到非常重要的作用,且我们前面的研究已证实KIF3A在哮喘儿童中低表达。KIF3A低表达时还可以导致多种细胞凋亡,目前已研究发现的有感光细胞、肾小管上皮细胞等。那么KIF3A低表达时是否会导致气道上皮细胞凋亡呢?因此,本研究将在第一部分研究的基础上进一步探讨:1.通过人支气管上皮细胞16HBE14o-研究KIF3A表达水平与气道炎症及气道上皮细胞凋亡的相关性;2.将BALB/C小鼠作为研究对象探讨KIF3A表达水平与气道炎症及气道上皮细胞凋亡的相关性。方法1.体外实验1)使用人支气管上皮细胞16HBE 14o-作为实验对象,实验分组:a、正常对照组,仅用lipo2000处理;b、阴性对照组,转染scramble-si RNA;c、si RNA1干扰组,转染特异性靶向KIF3A的si RNA;d、si RNA2干扰组,转染特异性靶向KIF3A的si RNA;e、Adv空载体对照组,用Adv空载体感染细胞株;f、KIF3A高表达组,用KIF3AAdv载体感染细胞株。2)WB检测验证各细胞分组构建是否成功;3)用重组人IL-4、IL-13和TNF-α诱导处理实验细胞后,Annexin V和PI双染,流式细胞仪测定细胞凋亡;4)q RT-PCR检测各组细胞炎症指标CCL17、CCL26及IL-5、IL-8水平。2.体内实验1)将BALB/C小鼠作为研究对象,建立小鼠哮喘模型;2)模型建立后通过小鼠行为学表现、AHR检测、血清总Ig E检测、BALF中炎症细胞计数及肺组织HE染色验证BALB/C哮喘小鼠模型是否建立成功;3)使用携带KIF3A基因的Adv载体转染哮喘小鼠构建KIF3A高表达组(OVA+KIF3A组),利用Adv空载体转染哮喘小鼠作为KIF3A基因低表达组(OVA组)及正常小鼠转染Adv空载体作为对照(Normal组);4)q RT-PCR及WB检测3组小鼠气道上皮中KIF3A表达,TUNEL检测气道上皮细胞凋亡,q RT-PCR及ELISA检测3组小鼠肺组织中及BALF中相关炎症因子IL-4、IL-5、IL-13、IL-6、IL-8、IL-10及TNF-α水平;5)分析KIF3A表达与气道炎症因子和气道上皮细胞凋亡的相关性。结果1.体外实验:1)细胞凋亡分析发现KIF3A低表达后细胞凋亡明显增加,而KIF3A表达增高后可以显著减少细胞凋亡的数量(P0.05);2)q RT-PCR结果显示,KIF3A低表达时炎症指标CCL17、CCL26、IL-5及IL-8明显增高,而KIF3A表达增高后CCL17、CCL26、IL-5及IL-8水平显著下降(P0.05)。2.体内实验:1)q RT-PCR及WB检测结果显示,3组小鼠KIF3A差异表达构建成功(P0.05);2)TENUL检测发现,KIF3A低表达后细胞凋亡数量明显增多,KIF3A表达增高后可减少细胞凋亡数量(P0.05);3)3组小鼠肺组织及BALF中相关炎症因子IL-4、IL-5、IL-13、IL-6、IL-8、TNF-α检测结果显示KIF3A低表达时炎症因子水平明显增高,KIF3A表达增高后可显著降低炎症因子水平(P0.05);4)KIF3A表达与细胞凋亡相关性分析显示,KIF3A表达越低细胞凋亡越明显;5)KIF3A表达与炎症因子相关性分析显示,KIF3A表达水平与炎症因子IL-4、IL-5、IL-13及血清总Ig E水平呈负相关。结论KIF3A基因在哮喘中低表达,且KIF3A表达水平与哮喘气道炎症及气道上皮细胞凋亡密切相关,KIF3A表达水平越低,气道炎症越重且气道上皮细胞凋亡越明显。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R725.6
【图文】：

-1 qRT-PCR 检测外周血细胞中 KIF3A RNA in blood cells was detected by qR2 qRT-PCR 检测鼻腔粘膜细胞中 KIF3AA in nasal mucosal cells was detected b

qRT-PCR检测鼻腔粘膜细胞中KIF3AmRNAFig1-2KIF3AmRNAinnasalmucosalcellswasdetectedbyqRT-PCR.(*P<0.05)

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 邓过房;;2016年诺贝尔生理或医学奖背景下的细胞死亡方式再认识[J];中学生物学;2017年05期

2 宁旭;于忠鸣;;创造性的自主毁灭——细胞凋亡简介[J];中学生物学;2006年10期

3 刘春秋;卞茂红;;药物致红细胞凋亡的研究进展[J];临床输血与检验;2017年04期

4 刘晨;冯雪;;人CXCR4基因对胰腺癌SW1990细胞凋亡和细胞周期的影响[J];健康之路;2017年06期

5 王方;;过表达TIPE2上调BID分子促进H446细胞凋亡[J];科学中国人;2017年18期

6 贾宁;孙荣钊;;病毒感染对细胞凋亡的影响及作用机制[J];中国动物检疫;2012年08期

7 赵君怡;刘伟国;郭秀丽;;一氧化氮与细胞凋亡相关疾病的关系及其调控[J];中国药学杂志;2010年14期

8 黄小丹;;细胞凋亡与疾病[J];畜牧兽医科技信息;2009年05期

9 陈艺娟;邓甲兴;林永利;;中药影响细胞凋亡的研究进展[J];福建畜牧兽医;2008年01期

10 刘伍梅;汪铭书;程安春;周毅;刘芳;张平英;李雪梅;陈孝跃;;PRRSV感染Marc-145细胞凋亡的形态学观察[J];黑龙江畜牧兽医;2008年03期

相关会议论文 前10条

1 李佑生;王文健;刘毅;何春燕;何燕铭;陈伟华;应健;;黄芪多糖丹酚酸对高糖诱导的足细胞凋亡的影响[A];中华中医药学会血栓病分会第四次学术研讨会暨广东省中医药学会血栓病专业委员会首届学术研讨会论文集[C];2010年

2 覃玉荣;张志勇;;细胞浓度变化对细胞凋亡率影响及其机理初探[A];全国电磁兼容学术会议论文集[C];2006年

3 于青;袁伟杰;姚建;;晚期糖基化终末产物引起足细胞凋亡的机制[A];2007年浙沪两地肾脏病学术年会资料汇编[C];2007年

4 吴经纬;汤长发;;运动中细胞凋亡的线粒体变化特征[A];湖南省生理科学会2006年度学术年会论文摘要汇编[C];2007年

5 蒲小平;李长龄;屠鹏飞;宋志宏;;中药肉丛蓉成分抗神经细胞凋亡的实验研究[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年

6 符必谦;奚胜艳;王彦晖;;中药及复方促肿瘤细胞凋亡的作用及机制[A];第二届临床中药学大会论文集[C];2018年

7 林其谁;;线粒体与细胞凋亡[A];第七届全国生物膜学术讨论会论文摘要汇编[C];1999年

8 邱洁;高海青;;锌在细胞凋亡中的作用研究进展[A];山东省微量元素科学研究会第三届学术研讨会论文汇编[C];2006年

9 宁存德;;细胞凋亡与口腔疾病[A];FDI、CSA临床口腔进展学术会议论文汇编[C];1999年

10 华子春;;靶向性诱导肿瘤细胞凋亡药物研发[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

相关重要报纸文章 前10条

1 方方　曹雪琴;吴政星的挑战与求索[N];科学时报;2011年

2 实习生 刘雨亭;细胞凋亡如何推进？以触发波的“名义”[N];科技日报;2018年

3 ;“细胞凋亡疗法”正逐步成为治疗癌症的新途径[N];中国高新技术产业导报;2002年

4 记者 何德功;基因变异可能致癫痫[N];新华每日电讯;2004年

5 ;3’取代吲哚类衍生物诱导HL－60细胞凋亡的实验研究[N];中国医药报;2003年

6 ;As_(2)S_(2)与STI571协同诱导K562细胞凋亡[N];中国医药报;2003年

7 董学清 吴延华;阿胶抑癌作用显著[N];中国医药报;2003年

8 高书明;诱导癌细胞凋亡[N];中国医药报;2004年

9 杨堤林;中药可诱导肿瘤细胞凋亡[N];中国中医药报;2004年

10 记者张建松;治疗癌症新途径：细胞凋亡疗法[N];科技日报;2002年

相关博士学位论文 前10条

1 郭召;miRNA-502在椎间盘髓核细胞凋亡中的表达及干预机制[D];河北医科大学;2019年

2 何飞;HMGB1/RAGE轴介导内质网应激PERK/eIF2α/ATF4信号通路在急性呼吸窘迫综合征中的作用机制研究[D];南京大学;2019年

3 康星;土木香内酯和丹参酮Ⅰ诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用及其分子机制的研究[D];西北大学;2019年

4 高丹丹;Dicerandrol B通过内质网应激—线粒体损伤诱导人宫颈癌细胞凋亡的机制[D];吉林大学;2019年

5 耿刚;KIF3A基因与哮喘气道炎症及气道上皮细胞凋亡的相关性研究[D];重庆医科大学;2019年

6 吴晓龙;基于线粒体融合与分裂研究中医扶正与祛邪疗法诱导人急性髓系白血病KG-1a细胞凋亡的作用机制[D];山东中医药大学;2018年

7 李志良;压力经线粒体途径诱导髓核干细胞凋亡的机制研究[D];华中科技大学;2019年

8 谢欢;HUVECs分泌的外泌体通过抑制miR-21-3p减弱缺氧/复氧诱导的神经细胞凋亡[D];南昌大学;2019年

9 李玉明;猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导bystander细胞凋亡机制研究[D];中国农业科学院;2017年

10 魏薇;我国优势基因型弓形虫虫株致密颗粒蛋白15诱导人绒毛膜细胞JEG-3凋亡的机制研究[D];安徽医科大学;2018年

相关硕士学位论文 前10条

1 王薛;HBx基因对小鼠肝脏细胞凋亡和周期影响的体内研究[D];重庆医科大学;2019年

2 徐敏;miR-30a的高表达促进K562细胞凋亡及机制研究[D];重庆医科大学;2019年

3 关茗洋;基于肺组织芯片研究内质网应激在PM2.5诱导A549细胞凋亡中的作用[D];河北医科大学;2019年

4 车楠;花青素对过氧化氢诱导气道上皮细胞凋亡的影响及机制研究[D];延边大学;2019年

5 张京娜;基于金纳米光学探针监测毒素诱导的细胞凋亡及凋亡标志物的方法研究[D];江南大学;2019年

6 段一梦;壁虎活性组分通过ROS诱导人肝癌细胞凋亡的机制研究[D];河南科技大学;2019年

7 李婷;绿脓菌素通过线粒体损伤和细胞内Ca~(2+)的升高诱导NK92细胞凋亡[D];杭州师范大学;2019年

8 王冉;钛钽生物梯度复合材料生物安全性的研究[D];华北理工大学;2019年

9 黄紫乐;NO供体JS-K经PI3K/Akt信号通路诱导SMMC7721细胞凋亡及其机制研究[D];河南科技大学;2019年

10 张英朔;黄精皂苷的制备、抗癌活性及其机理[D];合肥工业大学;2019年

本文编号：2724875