小婴儿沙眼衣原体肺炎的连接酶链反应—酶联免疫吸附法诊断研究

发布时间：2020-06-22 06:27

【摘要】： 目的 探讨敏感性和特异性好，快速、准确、客观的沙眼衣原体(chlamydia trachomatis,CT)感染的诊断方法；比较组织培养(tissue culture,TC)和缺口-连接酶链反应(gap-ligase chain reaction,Gap-LCR)诊断CT的敏感性和特异性。 方法 采集我院新生儿科及门诊留察室输液的肺炎患儿鼻咽拭子标本接种入生长良好的McCoy细胞单层中，碘染色检查结果。在质粒基因探针的两端分别进行了地高辛和生物素标记，取鼻咽拭子(nasopharyngeal swab,NS)标本利用以上引物进行连接酶链反应，产物进行酶联免疫吸附(ELISA)检测和聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析；按扩大金标准，对TC阴性和Gap-LCR阳性结果分析选用主要外膜蛋白基因omp1引物进行多聚酶链式反应(PCR)反应分析；对TC和Gap-LCR都阴性标本，选用主要外膜蛋白基因omp1引物及质粒引物同时进行PCR分析，计算TC和Gap-LCR法敏感性、特异性、阳性预测值(positive predicative value,PPV)、阴性预测值(negative predicative value,NPV)，比 博士学位论文 中文摘要 较两种方法在检测Cr感染中的差异。 结果接种cT后，Mccoy细胞内有棕黑色包涵体形成，Gap一LCR 法检测Cl，标准株结果为阳性，而对临床分离株金黄色葡萄球菌、大肠 杆菌、肺炎链球菌及未感染的McCoy细胞提取DNA模板进行检测，均 没有阳性接果，提示LCR具有极强的特异性; TC检测标本393例，阳性结果为37例，阳性率为9.4%;TC的敏 感性为乃.5%(37/49)，特异性为100%(344/344)，PPV为100%(37/37)， NPv为%.6%(3中钉356)。质粒G叩一LCR一PAGE与Gap一LCR一ELISA检测 阳性率分别为n.7%仔6/393)和12.2%砰8/393)。质粒Gap一LCR卫AGE的 敏感性为91.8%(45/49)，特异性为99.7%(343/344)，PPV为97.8% (45/46)，脚v为95.5%(343/3 47)。质粒Gap~LCR~ELISA的敏感性 为95.9%(47/49)，特异性为99.7%(343/3 44)，PPV为97.9%(47/48)， NPv为99.4%(343/345)。用配对梦检验检测结果显示: GaP一LCR一PAGE、GaP一LCR一ELISA与TC比较均为P0.05，差异有显 著性，Gap一LCR优于Te。 结论LCR法是一种快速而准确的检测CT方法，LCR法敏感性 高于TC，LCR法特异性高。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R725.6
【图文】：

质粒Gap一LCR的两种检测方法均阳性，后经omPI引物PCR证实为真阳性有10例(图1一5)，阴性有1例;本实验中有1例鼻咽拭子培养阴性，Gap一LCR一PAGE阴性，而GaP一LCR一ELISA阳性，后经。呷1引物pCR证实为金标准阳性(表4.1);TC与质粒Gap一LcR两种检测方法均阴性的344例标本，同时用质粒引物(图l一6)和omPI引物作PCR检测，1例同时阳性，符合扩大金标准，其余为阴性(表4.2)。即按扩大金标准

48345393米P二0.003<0.05图1一7:GaP.LCR一PAGE，Gap.LCR一EusA和培养法检测阳性率比较6.Cl，检测各种结果的比较(表6一1):分别用配对xZ检验方法检测Gap.LCR一PAGE和Tc法及GaP~LCR一usA与TC法的统计学结果显示:GaP一LCR卫AGE、G叩一LCR一EuSA与TC法比较均为P<0.05，差异有显著性，GaP·LcR优于TC法。特异性等其它指标几种检测方法相比差异不大，所以与Tc法相比在基本不降低特异性的情况下，GaP一LCR法可以大大提高检测的敏感性。

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