DHPLC技术在儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断及携带者筛查中的应用

发布时间：2020-06-23 12:31

【摘要】： 目的:评价变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术在儿童型脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)基因诊断及携带者基因筛查中的应用价值。 方法:对37例临床疑诊为儿童型SMA的患者采用临床标准进行诊断,临床诊断SMA和非SMA。同时,应用DHPLC技术联合双重PCR技术对所有入选患者、临床标准诊断为SMA患者的双亲进行SMN1拷贝数检测,作出SMA患者基因诊断及判断携带者。对入选患者的两种诊断结果进行对比,分析灵敏度、特异度等。分析SMA患者双亲的携带情况。 结果:1、37例入选患者,临床标准诊断SMA17例,非SMA20例;2、DHPLC技术检测37例入选患者:17例临床诊断SMA患者中,14例SMN1拷贝数为0,为纯合缺失型SMA患者,2例SMN1拷贝数为1,为杂合缺失型SMA患者,1例SMN1拷贝数为2,为非SMA;20例临床诊断为非SMA者,SMN1拷贝数为2,基因诊断为非SMA。3、与临床标准诊断相比,DHPLC技术诊断SMA灵敏度为94.1%,特异度为100%。17例临床诊断为SMA患者的34名双亲中,1例SMN1拷贝数为0,6例SMN1拷贝数为2,27例SMN1基因拷贝数为1,考虑为“1+0”型携带者,该法对SMA患者双亲的携带检出率为79.4%。 结论:1、应用DHPLC技术可以检测出SMN1基因拷贝数,进行SMA基因诊断灵敏度和特异度高,方便、快捷,适合临床应用。2、应用该技术可以进行SMA携带者筛查,为遗传分析和产前诊断提供理论依据。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R744;R450
【图文】：

3.2 DHPLC 技术检测结果校正样本：约 2.7 分钟出现 SMN1 峰，约 6.2 分钟出现 KRIT1 峰，两基因峰型正常，大致呈正态分布曲线，应用软件读取两者峰高，SMN1 峰高 1.074，KRIT1 峰高 1.259，两者比值约为 0.85（1.074/1.259），以该比值作为本试验的校正系数。见图 3.1.1。入选病例样本：37 例样本 SMN1、KRIT1 基因均在相应的时间出现，且峰型正常，大致呈正态分布曲线。其中 14 例 SMN1 峰高很低，接近 0，分析 SMN1拷贝数为 0，考虑为 SMN1 患者（纯合缺失型）；2 例 SMN1 峰高约为 KRIT1的一半，经校正系数校正后为 1/2，分析 SMN1 拷贝数为 1，考虑为 SMN1 患者（杂合缺失型）；21 例 SMN1 峰高接近 KRIT1，经校正系数校正后为 1，分析SMN1 拷贝数为 2，考虑为非 SMA。见图 3.1.2。

KRIT1 峰高 1.259，两者比值约为 0.85（1.074/1.259），以该比值作为本试验的校正系数。见图 3.1.1。入选病例样本：37 例样本 SMN1、KRIT1 基因均在相应的时间出现，且峰型正常，大致呈正态分布曲线。其中 14 例 SMN1 峰高很低，接近 0，分析 SMN1拷贝数为 0，考虑为 SMN1 患者（纯合缺失型）；2 例 SMN1 峰高约为 KRIT1的一半，经校正系数校正后为 1/2，分析 SMN1 拷贝数为 1，考虑为 SMN1 患者（杂合缺失型）；21 例 SMN1 峰高接近 KRIT1，经校正系数校正后为 1，分析SMN1 拷贝数为 2，考虑为非 SMA。见图 3.1.2。图 3.1.1：约 2.7 分钟出现 SMN1 峰，6.2 分钟出现 KRIT1 峰，峰高比值约为 0.85（1.074/1.259）

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