人膜联蛋白A3原核表达及其在哮喘患儿淋巴细胞表达水平研究

发布时间：2020-07-13 18:01

【摘要】：小儿支气管哮喘是儿童常见的慢性呼吸系统疾病。近年来其发病率在世界范围内呈上升趋势,发达国家儿童哮喘的患病率高达10%以上。由于哮喘常反复发作,难以根治,所以严重影响患儿的身心健康,也给患儿家长带来了沉重的经济负担和精神压力。本实验室研究发现膜联蛋白A3在哮喘大鼠淋巴细胞中表达上调,因此我们推测膜联蛋白A3可能在哮喘病的起因和形成等过程中发挥重要的作用。 本研究根据NCBI上报道膜联蛋白A3的序列设计引物,克隆得到膜联蛋白A3基因anx A3,经测序鉴定序列与已报道的完全一致,其ORF为1026bp,编码341个氨基酸。我们利用原核表达载体pEASY成功构建了重组载体pEASY-anx A3,并在大肠杆菌Transetta(DE3) (DE3)中成功表达。利用镍柱亲和层析的原理,成功纯化蛋白ANX A3。利用商业化抗体和Western Blot技术检测鉴定,表达纯化的蛋白为膜联蛋白A3。我们用纯化的蛋白ANX A3免疫兔子,抽取血清,提取并纯化抗体。点印记实验表明我们纯化的抗体可用于ANX A3蛋白的鉴定。利用Western Blot实验,检测了正常儿童和哮喘患儿ANX A3蛋白的表达情况,结果发现在哮喘发作期患儿淋巴细胞中ANX A3的表达上调,进一步证实了ANX A3与小儿哮喘发作相关,ANX A3将来有望成为小儿哮喘的诊断标识分子和治疗的靶点。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R725.6
【图文】：

RNA提取结果

第3章结果与讨论一个长约1100bp的片段(图3.2)。 M1ZB ~1100图3.2目的基因PCR扩增 Fig.3.2PCRamPlifyofaoAJ M:nLZO00Marker;l，2:PCR产物;B:空白对照 M:DL20OOMarker:1， 2:PCRProduction:B:Blankeontrol(3)重组质粒的鉴定结果将目的片段连接到博As丫Blunt载体上，转化大肠杆菌感受态肠皿51一Tl。利用菌落PCR鉴定阳性转化克隆，随机选取3个阳性克隆(图 3.3)。 MB123 1100bD图3.3菌落PCR鉴定Fig.3·

~11003.2目的基因PCR扩增.3.2PCRamPlifyofaoAJ2:PCR产物;B:空白对照PCRProduction:B:Blankeontrol结果As丫Blunt载体上，转化大肠杆菌感化克隆，随机选取3个阳性克隆(图

【参考文献】

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本文编号：2753793