新生大鼠大脑皮层神经干细胞定向分化为神经元过程中细胞骨架蛋白—tau蛋白表达的研究

发布时间：2020-07-16 19:20

【摘要】：目的 神经干细胞(Neural stem cells NSCs)的研究是当前神经科学研究的热点,随着神经干细胞的分离培养成功,探索神经干细胞增殖、分化机制尤其是其定向分化机制受到人们的关注。研究表明,神经干细胞属于多能干细胞,在体外它能在含有EGF和/或bFGF的无血清培养基中保持不断增殖状态,并一直保持干细胞的特性,在诱导因素作用下可以分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 神经细胞发育过程中,细胞生长、迁移、轴突和树突的发出、把大分子物质和细胞器运送到突起的分支以及轴突与其他神经细胞建立突触联系等,均与细胞骨架有关。微管是神经元中重要的细胞骨架成分之一,不仅维持细胞的形态,而且参与细胞的多种功能,包括物质转运、信息传递等等。tau蛋白是一种微管相关蛋白,是保持微管稳定性的重要因素,在结构和功能上与微管密不可分。另外,tau蛋白还参与轴突发育和维持轴突形态相关的信号传导过程。 本实验采用神经干细胞分离、培养、鉴定及定向分化、免疫细胞化学、免疫荧光标记术、电镜技术、图像分析等方法研究细胞骨架蛋白-tau蛋白表达变化,并探讨其与神经干细胞定向分化的神经元形态变化的相关性,希望对神经干细胞定向分化机制及其与细胞骨架蛋白的关系提供实验依据。 实验方法 1.神经干细胞原代及继代培养:无菌取新生大鼠大脑皮层组织,剪碎,0.25%胰蛋白酶消化,过滤,离心,以1～2×10~5个/ml密度种植于无血清培
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R722.1
【图文】：

随着培养时间的增加，细胞突起逐渐伸长，突起数量增加。到第6一7天细胞成熟，胞体呈锥体形或圆形，核大，位于细胞中间，清晰可见，突起4一6个，细长，伸展良好(图2)。·15·

2.nestin免疫细胞化学染色结果整个神经球呈棕黄色染色(图3A)，可见神经干细胞呈圆形或椭圆形，细胞核较大、未着色，细胞质较少，胞质内nestin表达呈强阳性(图3B)。图3大脑皮层神经千细胞原代培养形成的神经球nestin免疫细胞化学染色。x400A:可见整个神经球呈棕黄色染色。B:nesnti在神经干细胞的胞质中有表达，核未着色。3.nestin免疫荧光细胞化学染色结果采用Txeas一erd荧光二抗标记nestni，可见整个神经球发红色荧光(图4)。4.NSE免疫细胞化学染色结果光镜下可见棕黄色NSE反应产物均匀分布于胞质与突起中，核未着色(图5)。

大脑皮层神经干细胞继代培养形成的神经球nestin免疫荧光染色x400可见整个神经球发红色荧光

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本文编号：2758402