儿童急性白血病细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子P21～（WAF1）、P27～（KIP1）表达及其与临床关系研究

发布时间：2020-07-31 19:19

【摘要】： 目的白血病是严重危害人类健康的造血系统肿瘤，也是儿童最常见的恶性肿瘤。探索白血病的发病机制从而最终根治这种疾病一直是医学界的重大课题。细胞周期是细胞生命活动的基本过程，细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。真核生物细胞周期失控是细胞过度增殖及癌变的重要原因。近年来对细胞周期的研究取得了许多突破性进展。发现并确立了细胞周期蛋白（Cyclin）、细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKI）在真核生物细胞周期调控中的作用。由细胞周期蛋白（Cyclin）依次激活相应的细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）所推动，Cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进展起着正调控作用，而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKI）则在细胞周期适当的时间点上抑制CDK的活性，从而对细胞周期起着负调控作用。目前已知的CKI可划分为两大类：一类为INK4，特异性抑制CDK4-CyclinD1、CDK6-CyclinD1的磷酸化激酶活性；另一类为KIP，抑制现已知的大多数CDK-Cyclin的磷酸化激酶活性。P21~(WAF1)、P27~(KIP1)属CKI家族中KIP WP=6 成员，在氨基末端有结构及功能相似性，都有一个保守的80个氨基酸序列，能抑制CDK4-CyclinD1、CDK6-CyclinK1、CDK2-CyclinE、CDK2-CyclinA的蛋白激酶活性。正常情况下，P21WAF1、P27KIP1以量的方式调节细胞周期和细胞分化，在绝大多数真核生物细胞中均有表达。研究发现P21WAF1、P27KIP1在某些实体瘤及成人白血病存在表达异常。本研究旨在探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21~(WAF1)、P27~(KIP1)在儿童急性白血病的表达情况及临床意义。方法采用流式细胞仪检测细胞周期。免疫组化测定白血病单个核细胞P21~(WAF1)、P27~(KIP1)表达情况；部分病人经治疗达缓解后随访；分别观察阳性率及表达强度。以同期特发性血小板减少性紫癜及正常增生性骨髓作为对照。采用卡方检验及t检验对实验数据进行统计学处理。结果初诊AL患儿的G0/G1%明显低于对照组(P0.05), S%和G2/M%则高于对照组(P0.05), 经诱导化疗达缓解后复查其骨髓细胞周期表现为：G0\G1期细胞增加，而S及G2/M期细胞减少，前后变化有显著差异(P0.05)。测得32 例白血病骨髓涂片标本中，P21WAF1总阳性率为12.5%（4/32），其中ALL 9.1%（2/22），ANLL 20%（2/10）；P27总阳性率为 40.6%（13/32），其中ALL 50%（11/22），ANLL 40 %（4/10）。与对照组比较，ALL及ANLL P21WAF1或P27KIP1表达阳性率均低于对照组(P0.05)。在阳性病例中，P21WAF1阳性细胞百分率在ALL与AML无差异，但积分显示阳性程度ALL弱于AML； P27KIP1阳性细胞率及积分在ALL及AML均无显著差异（P＞0.05）。随访观察部分病例， WP=7 经诱导化疗达到完全缓解后随访，两种蛋白有阳转或表达增强现象。本研究发现多数非白血病病人为P21~(WAF1)、P27~(KIP1)阳性表达，而白血病病人其阳性率明显低于对照组，阳性病例阳性程度弱于对照组，因此，白血病病人存在P21~(WAF1)、P27~(KIP1)低表达。P21~(WAF1)、P27~(KIP1)正常作用靶位位于细胞核，于细胞浆合成的P21~(WAF1)、P27~(KIP1)蛋白需跨过核膜发挥其调控作用。本研究中部分P27KIP1阳性表达的细胞则见于细胞浆，因此，白血病细胞周期调控的异常除与其蛋白表达量有关外，可能与P27KIP1蛋白的跨核膜障碍也有一定的关系。结论实验结果证实：白血病骨髓细胞存在细胞周期的紊乱。白血病P21~(WAF1)、P27~(KIP1)低表达及在急性淋巴细胞白血病与急性非淋巴细胞白血病中无显著差异，提示P21~(WAF1)、P27~(KIP1)低表达均参与了急性白血病的发生发展；随访部分病人发现随临床缓解，P21~(WAF1)、P27~(KIP1)表达增强，提示P21~(WAF1)、P27~(KIP1)可以作为病情恢复的一个分子学指标。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R733.71

【参考文献】