别嘌呤醇对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用研究

发布时间：2020-08-03 07:45

【摘要】： 目的本实验通过制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,腹腔注射外源性别嘌呤醇(ALLO),观察ALLO对新生HIBD大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟自由基(·OH)及caspase-3基因表达的影响,以探讨ALLO保护脑组织的机制,以期为临床治疗新生儿HIBD提供有效的方法和途径。方法 1.制备HIBD模型:将新生7日龄Wistar大鼠行颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧(8%O_2,92%N_2)处理2小时,制成HIBD模型。观察缺氧时动物行为变化。 2.行为能力检查:分别于手术前及缺氧后1小时对每只新生大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。 3.脑大体形态检查:分别于处死时观察每只新生大鼠脑组织的大体形态。 4.SOD、MDA、·OH及caspase-3基因表达测定:56只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组(sham)、生理盐水对照组(NS)和ALLO干预组(ALLO)。假手术组(8只)只予分离但不结扎左侧颈总动脉,于手术恢复后24h处死。其余两组于缺氧结束后1h和24h两次腹腔注射生理盐水或ALLO,并于末次给药后0.5h、24h以及72h处死(每组8只动物),以患侧脑组织为标本,应用黄嘌呤氧化酶法测定SOD,应用改良的硫代巴比妥酸法测定MDA,应用Fenton反应测定·OH,应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定caspase-3基因的表达。结果 1.行为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定,56只全部正常。sham组测定结果同前。经历缺氧缺血的48只大鼠,26只不能翻身,38只出现夹尾左旋,16只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。 2.脑大体检查新生大鼠HIBD后NS对照组结扎侧半球脑组织受损严重,在24h时苍白、水肿明显,体积明显大于对侧,72h可看到结扎侧半球局部出现液化坏死灶;ALLO干预组大鼠未见上述改变或仅见结扎侧脑半球轻微的水肿;sham组大鼠大脑半球左右对称,未见任何病理变化。 3.SOD、MDA、·OH表达检测结果与sham组比较,MDA、·OH在HIBD后24h、72h NS对照组的表达明显增高(P＜0.05),而ALLO干预组水平则较同时间点的NS对照组低(P＜0.05)。总SOD活力在HIBD后24h、72h NS对照组明显降低,与sham组比较有统计学意义(P＜0.05),而ALLO干预组水平则较同时间点的NS对照组有所回升(P＜0.05)。HIBD后0.5h NS对照组与ALLO干预组及sham组两两比较均无统计学意义(P＞0.05)。 4.caspase-3基因表达检测结果与sham组比较,caspase-3基因在HIBD后24h、72h NS对照组表达明显增高(P＜0.05),而ALLO干预组水平则较同时间点的NS对照组低(P＜0.05)。HIBD后24h、72h NS对照组与假手术组、与同时间点ALLO干预组比较均有统计学意义(P＜0.05),而HIBD后0.5h NS对照组与ALLO干预组及sham组两两比较均无统计学意义(P＞0.05)。结论 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。 2.新生大鼠HIBD后MDA、·OH表达增高,SOD活力降低,证实存在自由基的损伤;caspase-3 mRNA升高,证实存在细胞凋亡。 3.ALLO可能通过抑制MDA、·OH的表达、保护SOD并下调caspase-3基因表达、抑制脑细胞凋亡起到脑保护作用,为ALLO临床治疗新生儿HIBD提供了进一步的理论依据。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R722.1
【图文】：

缺氧缺血,脑组织,活力,对照组

明显的降低(P<0.001)，而ALLO治疗组(28.54土1.23，30.06士1.55，30.78士1.67)与相同时间点的NS对照组分别比较均有明显的回升(尸<0.05)，见表1及图1; 3.2MDA含量伍m口l/mgProt夕:与sham组相比 (1.08士0.15)，不同时间点的NS对照组MDA含量 (3.24士0.23，2.04士0.41， 1.97士0.57)均有明显的升高(P<0.01)，而ALLO治疗组(1.83士0.53，1.60士0.15，1.37士0.07)与相同时间点的NS对照组分别比较均有明显的降低(尸<O，05)

琼脂糖凝胶电泳,对照组,产物

图4琼脂糖凝胶电泳结果注:DLZ000Marker6条电泳带由上往下依次为Z000bp、I000bp、75Obp、SOObp、25Obp、IO0bp;日一aetin产物长度为15Obp;样本产物长度为147bp，与队aetin相当，均在25Obp与IOObp之l‘司。.2PCR结果一与sham组相比(23.06士10.62)，不同时间点的NS对照组CasPase一3的相量(100.86士24.94，189.86士31.55，136.60士11.63)均有明显的升高(P<1)，而刁泪同时}‘司点的ALLO组(65.96士20.88，39.31士23.83，32.52士18.12)S对照组分别比较均有明显的降低(尸<0.肠)，见图5一9、表2及图10。

扩增曲线,标本,产物,电泳带

图4琼脂糖凝胶电泳结果注:DLZ000Marker6条电泳带由上往下依次为Z00I000bp、75Obp、SOObp、25Obp、IO0bp;日一aetin产物长15Obp;样本产物长度为147bp，与队aetin相当，均在2与IOObp之l‘司。PCR结果一与sham组相比(23.06士10.62)，不同时间点的NS对照组C(100.86士24.94，189.86士31.55，136.60士11.63)均有明显)，而刁泪同时}‘司点的ALLO组(65.96士20.88，39.31士23.83，3对照组分别比较均有明显的降低(尸<0.肠)，见图5一9、表2

【参考文献】