新生大鼠大脑皮层神经干细胞定向分化为神经元过程中钙调蛋白相关性研究

发布时间：2020-08-14 09:55

【摘要】：目的 神经干细胞是一种多能干细胞,在体外培养可保持不断增殖状态,并一直保持干细胞的特征,其在一定诱导因素的作用下具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力。 钙调蛋白(CaM)作为细胞内重要的一种Ca~(2+)结合蛋白一直被人们所关注。CaM是钙离子受体蛋白,具有多种功能,介导了很多Ca~(2+)调节的生理过程。现已证明,脑和一些内分泌器官是CaM含量最丰富的器官。典型的动物细胞含有10~7以上CaM分子,占细胞蛋白总量高达1%。CaM有广泛的靶物,在不同组织细胞、不同生理状态下及不同的发育阶段所起的作用均不相同。 有资料表明,细胞内Ca~(2+)浓度与肌动蛋白的功能发挥密切相关,故而作为Ca~(2+)受体的CaM与肌动蛋白功能发挥亦有相关性。肌动蛋白是一种普遍存在的细胞骨架蛋白,其主要参与微丝的形成,并与中间丝、微管共同构成和维持细胞的正常功能。肌动蛋白作为一种骨架蛋白在细胞生长和发育过程中发挥重要作用,其不仅与细胞形态密切相关,而且参与细胞的运动、物质转运以及细胞分裂、分化、基因表达等多种功能。 许多报道证实CaM是DNA重组以来最重要的发现之一,但有关CaM在神经干细胞培养和定向分化过程中的作用,这方面的研究国内外尚无报道。本研究拟探讨CaM在大脑皮层神经干细胞定向分化为神经元过程中的时空表达对丰富神经干细胞的理论内容和搞清神经干细胞特性提供实验依据。 实验方法 1、新生大鼠大脑皮层神经干细胞原代及继代培养:无菌取新生大鼠
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R722.1
【图文】：

折光性很强。以后细胞集落不断增大、增多，培养至第7d时，每个集落细胞可达数十，甚至数百个细胞不等。细胞集落呈球形或卵圆形、桑堪状、悬浮生长(图1)，生长活力很好。这些细胞集落经neatni免疫组化染色后，免疫反应强阳性(图2)。1.2神经干细胞定向分化为神经元及鉴定:将神经干细胞机械吹打，改用含有血清及诱导因子的培养基中培养，4h左右见细胞已贴壁，第2天可有细胞分化成有突起的细胞，分化的细胞中，可见三种类型的细胞:有的细胞较大，似平铺在盖玻片上，细胞突起较多、较粗，细胞数量很多;有的细胞较小

落细胞可达数十，甚至数百个细胞不等。细胞集落呈球形或卵圆形、桑堪状、悬浮生长(图1)，生长活力很好。这些细胞集落经neatni免疫组化染色后，免疫反应强阳性(图2)。1.2神经干细胞定向分化为神经元及鉴定:将神经干细胞机械吹打，改用含有血清及诱导因子的培养基中培养，4h左右见细胞已贴壁，第2天可有细胞分化成有突起的细胞，分化的细胞中，可见三种类型的细胞:有的细胞较大，似平铺在盖玻片上，细胞突起较多、较粗，细胞数量很多;有的细胞较小，细胞突起较少，但突起很长，折光性较强，有的在较大细胞之上，细胞数量较少;还有一种最小的细胞，细胞数量也最少，细胞突起较短、较细较少(图3)。分化细胞经NSE免疫组化染色后

细胞突起较少，但突起很长，折光性较强，有的在较大细胞之上，细胞数量较少;还有一种最小的细胞，细胞数量也最少，细胞突起较短、较细较少(图3)。分化细胞经NSE免疫组化染色后，见较小细胞，为NES免疫反应阳性细胞，即为神经元(图4)，胞体较小、呈椭圆或三角形，可见2一4个突起且较长。2.钙调蛋白免疫细胞化学染色结果大脑皮层神经干细胞定向分化为神经元的过程中，分化第l天，细胞体积较小，突起较短，CaM蛋白主要分布于细胞核及核周(图5一A)，分化第3、5、7天

【共引文献】

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本文编号：2792874