GATA-6基因在内源性一氧化碳抑制血管平滑肌增殖中的作用研究

发布时间：2020-09-01 14:19

　　 目的探讨GATA-6基因在内源性一氧化碳(CO)抑制肺动脉平滑肌细胞(PVSMCs)增殖中的作用。 方法体外培养雄性SD大鼠的肺动脉平滑肌细胞(PVSMCs)，分为五个实验组：1组为正常对照组；2组为血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB 20ng/ml)诱导组；3组是血小板衍生生长因子-BB加低浓度氯血红素(Hemin 10μmol/1)组；4组是血小板衍生生长因子-BB加中浓度氯血红素(Hemin 20μmol/1)组：5组是血小板衍生生长因子BB加高浓度氯血红素(Hemin 30μmol/1)组。在加不同条件后的8小时、16小时、24小时分别进行以下实验：1、四唑盐(MTT)法测定PVSMCs增殖程度；2、氚掺入法测定PVSMCs DNA合成情况；3、测定培养上清液中碳氧血红蛋白(HbCO)的相对含量；4、RT-PCR法测定GATA-6基因mRNA的表达。 结果1)PDGF-BB能明显刺激血管平滑肌细胞的增殖，在8小时、24小时其MTT值相比有统计学差异(0．0278±0．0076 vs 0．0588±0．0054，p＜0．05)，在24小时PVSMCs的增殖最明显。内源性CO可抑制PDGF-BB诱导的PVSMCs增殖，高浓度Hemin(30μmol/1)组在不同时间上的PVSMCs增殖有统计学差异(0．0180±0．0015，0．0157±0．0055，0．0092±0．0047，p＜0．05)，24小时不同条件组别之间相比有统计学差异(0．0350±0．0054，0．0588±0．0054，0．0252±0．0064，0．0173±0．0047，0．0092±0．0047，p＜0．05)，说明内源性CO对PVSMCs增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖关系。2)PDGF-BB可增加PVSMCs的DNA合成，不同时间条件下其氚掺入比较有统计学差异(222．00±29．32vs 752．00±142．33 vs 1112．00±120．51，p＜0．05)，DNA的合成在24小时最明显，而内源性CO对PVSMCs DNA合成的抑制作用也呈剂量依赖关系，8小时不同组别的DNA合成情况有统计学差异(222．00±29．32，114．67±11．55，p＜0．05)，16小时不同组别的DNA合成情况有统计学差异(752．00±142．33，220．83±33．22，93．17±13．00，p＜0．05)，24小时不同组别的DNA合成情况有统计学差异(1112．00±120．51 vs 210．17±35．16，1112．00±120．51 vs 86．50±8．22，1112．00±120．51 vs 53．17±7．88，210．17±35．16 vs 53．17±7．88，p＜0．05)。3)氯血红素能诱导平滑肌细胞产生内源性一氧化碳，在相同浓度Hemin诱导下，不同时间培养上清液仲HbCO的相对含量比较有统计学差异，24小时HbCO的相对含量最高；在相同时间，不同浓度Hemin诱导的PVSMCs产生CO量相比有统计学差异，高浓度Hemin组培养上清液中HbCO的含量最高，说明Hemin通过时间和浓度依赖的方式诱导内源性CO的产生。4)PDGF-BB在2小时诱导PVSMCs的GATA-6基因表达明显下调，于6小时恢复以前的水平。这种下调可以被内源性CO所抑制，其GATA-6基因表达情况也呈浓度依赖的方式，即高浓度Hemin(30μmol/1)组GATA-6基因表达下调的抑制作用最明显，但是CO的这种抑制GATA-6基因表达下调的作用在6小时也恢复到以前的水平。 结论氯血红素(Hemin)能以时间和浓度依赖的方式诱导PVSMCs产生内源性一氧化碳。PDGF-BB以时间依赖的方式能刺激PVSMCs的增殖和DNA合成，同时抑制GATA-6基因的表达，内源性CO能以剂量和时间依赖的方式抑制PDGF-BB诱导的PVSMCs增殖和DNA合成，同时抑制PDGF-BB所致的GATA-6基因表达下调，此作用亦呈浓度依赖方式。本实验提示，内源性CO能有效的阻止PDGF-BB诱导的PVSMCs的增殖和DNA合成，此抑制作用可能通过对GATA-6基因的调节来实现。
【学位单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R725.4
【部分图文】：

取总RNA的鉴定RNA经1%琼脂糖凝胶电泳检测，澳化乙锭显条带较清楚，无DNA污染条带，表明提取的图16)闷嘛一备图16，不同条件下GATA一6RT-PCR电泳图(图

不同组别GArA一6/GAPDHPCR条带象素比值比较1:对照组2:POGF诱导组3:POGF诱导加低浓度:PDGF诱导加中浓度Hemin组5:PDGF诱导加高浓度H图可以看出，在正常静止状态的平滑肌细胞中，GAI’A的表达，血小板衍生生长因子(PDGF)刺激后，其表达氯血红素(Hemin)可以浓度依赖的方式阻止PDGF对调。后不同组别的GATA一6表达是PDGF诱导组还是加Hemin干预组，PVSMCs的表达均开始恢复至干预前的正常水平，不同组别之间没

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本文编号：2809845