Caspase-3抑制剂抗新生鼠缺氧缺血脑损伤实验研究

发布时间：2020-09-04 07:39

　　 目的：观察缺氧缺血脑损伤(HIBD)新生鼠脑组织Caspase-3活性、Caspase-3蛋白表达量变化，了解Caspase-3特异性肽类抑制剂AC-DEVD-CHO对新生鼠HIBD的治疗效果、最佳治疗剂量、以及对鼠的远期学习记忆能力和运动能力影响。旨在为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)探索新的途径。 方法：采用改良Levine法建立新生鼠HIBD模型后进行以下研究：(1)应用四肽荧光底物法检测HIBD后1h、12h、24h、48h新生鼠脑Caspase-3活性，应用免疫组化法、TUNEL法半定量检测上述各时间点新生鼠脑组织的活性Caspase-3蛋白表达量和细胞凋亡数。(2)分组给予HIBD后1h新生鼠不同剂量Ac-DEVD-CHO(50ng、100ng、200ng、300ng、400ng)脑室注射, 24h后检测各组新生鼠患侧脑组织Caspase-3活性的变化，选出最佳治疗剂量；(3)采用选出的最佳治疗剂量300ng脑室注射, 24h后处死动物作病理学观察、TUNEL法检测原位细胞凋亡，喂养鼠至1月龄时测试鼠学习记忆和运动能力。 结果:(1)HIBD后1h患侧(左侧)脑组织Caspase-3活性已升高，HIBD后24h达高峰，48h后明显下降。其显著性检验如下：a、HIBD后各时间点之间比较左侧脑组织Caspase-3活性有显著性差异( p0.01)；b、HIBD后各时间点与假手术组比较左侧脑组织Caspase-3活性有显著性差异(p0.05)；c、HIBD后各时间点左侧和右侧比较Caspase-3活性有显著性差异(p0.05)；d、HIBD后各时间点与假手术组比较右侧脑组织Caspase-3活性稍有增加，但差异无显著性。(2)HIBD新生鼠患侧脑组织活性Caspase-3阳性细胞数明显增多。假手术组左侧脑组织阳性细胞占细胞总数的百分率为0.65±0.67％；HIBD24h组左侧脑组织阳性细胞百分率为52.94±7.9％；HIBD48h组为41.5±5.7％。HIBD24、48h组较假手术组阳性细胞百分率均有显著差异(p0.01)。(3)HE染色见HIBD组新生鼠患侧皮质海马凋亡细胞呈弥散或小灶性分布，细胞体积缩小、核固缩、核碎裂。HIBD24、48h组凋亡细胞明显增多。(4)HIBD组新生鼠患侧脑组织TUNEL染色阳性细胞数随时间增多，假手术组新生鼠左脑TUNEL阳性细胞数占细胞总数0.6±0.77％，HIBD1h组左侧脑组织阳性细胞占细胞总数5.2±1.93 ％，HIBD12h组占18.5±6.23％；HIBD24h组占44.13±8.41％；HIBD48h组占30.8±9.58％；HIBD1W组占14.0±7.1％。HIBD各组的细胞凋亡百分率较对照组均有显著差异 WP=7 (p0.01)，各组之间比较也均有显著差异(p0.01)；(5)HIBD后1h分别予脑室注射Ac-DEVD-CHO50ng、100ng、200ng、300ng、400ng，24h 后检测，患侧脑组织Caspase-3活性随注射Ac-DEVD-CHO剂量增加而递减；(6)HIBD后24h检测，Ac-DEVD-CHO300ng治疗组新生鼠患侧脑组织TUNEL阳性细胞百分率为30.2±11.2％，N.S.对照组为44.6±12.4％，差异显著(P0.01)；(7)Ac-DEVD-CHO治疗组新生鼠较N.S.对照组在穿梭箱实验中受电击时间显著缩短(p0.05)；电击次数亦减少，但差异不显著；Ac-DEVD-CHO治疗组较N.S.对照组自主活动次数、疲劳仪实验潜伏期均无显著差异。 结论：1、HIBD新生鼠患侧脑组织中Caspase-3明显被激活，提示Caspase-3在HIBD神经细胞凋亡中起重要作用。2、HIBD新生鼠脑皮质和海马的神经细胞凋亡随时间先呈依从性增多，48h后逐渐下降。3、Ac-DEVD-CHO侧脑室注射可显著减少HIBD新生鼠脑细胞凋亡，提示其对HIBD有治疗作用。4、Ac-DEVD-CHO能改善HIBD新生鼠的远期学习记忆能力，但对其远期运动能力无影响。
【学位单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2003
【中图分类】：R722.121

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 祁岩超;刘振寰;柴铁劬;唐纯志;;针刺抑制幼鼠HIBD脑组织神经细胞凋亡的实验研究[J];中国实用神经疾病杂志;2011年15期

2 栾佐;崔盈;杨印祥;王彩英;古桂雄;;粒细胞集落刺激因子对移植的人神经干细胞体内分化的影响[J];临床儿科杂志;2011年09期

3 全裕凤;张华;;HIF-1α和VEGF在高氧暴露早产鼠视网膜的表达及地塞米松的干预效应[J];中国医药指南;2011年25期

4 谭挺;胡志奇;;端粒酶逆转录酶高表达新生鼠真皮细胞株的构建及其生物学功能的初步研究[J];实用医学杂志;2011年12期

5 张丽娟;钟荣梅;吴星恒;;心脉隆对窒息新生鼠心肌NF-κB和TNF-α的影响[J];南昌大学学报(医学版);2011年03期

6 王德健;李巧云;徐世军;曾南;;人参皂苷Rg1对新生鼠HIBD后血管再生的影响[J];四川大学学报(医学版);2011年04期

7 肖华平;肖金仿;陶涛;古妙宁;;丙泊酚对新生鼠神经干细胞增殖及学习记忆的影响[J];临床麻醉学杂志;2011年06期

8 颜小华;陈启文;徐昕;李延成;严绍明;黄振刚;张丽娜;;脐血间充质干细胞静脉移植治疗新生鼠脑血肿继发脑水肿[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年32期

9 魏二霞;柯晓云;陈慧;刘子彬;吴伟;;不同吸氧浓度对新生鼠视网膜血管发育和血管内皮生长因子表达的影响[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年24期

10 郑奇辉;李国才;程静;方芳;吴中海;;cAMP-PKA通路参与Ⅱ组代谢性谷氨酸受体对新生鼠离体延髓脑片呼吸节律性放电的调节[J];生理学报;2011年03期

相关会议论文 前10条

1 吴中海;潘秉兴;王宁黔;史月;李自强;;新生鼠离体脑片吸气神经元的分布及非NMDA受体对呼吸的调制[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年

2 刘超;陈璐;袁庆新;刘翠萍;茅晓东;;宫内营养不良对新生鼠胰腺发育及功能影响的研究[A];第二届全国妊娠糖尿病学术会议论文汇编[C];2008年

3 陈玉君;黄丽萍;庞玉生;陈克正;;内皮素受体、内皮素转换酶-1在新生鼠肺出血发生过程中肺内的表达[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编（上册）[C];2010年

4 吴中海;史月;王剑莉;李自强;;异丙酚对新生鼠离体延髓脑片吸气神经元放电的影响[A];中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议论文摘要汇编[C];2003年

5 潘丽;步军;孙建华;薛辛东;;β-catenin在高氧致新生鼠BPD中的作用及其机制的研究[A];第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编[C];2009年

6 庞希宁;张海心;刘朝阳;杨立松;夏鲲;顾文佳;宋今丹;吴玉斌;李玉杰;;内毒素诱导新生鼠产生一氧化氮与肾脏损伤的研究[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年

7 董伦;傅文燕;辛华;王晓静;;绞股蓝皂苷对酒精损伤的新生鼠脑内神经干细胞的保护作用研究[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年

8 金海燕;胡智勇;吴亦栋;周晨;;氯胺酮对新生鼠海马Tau蛋白mRNA及Ser396/404位点表达影响[A];2011年浙江省小儿外科学术年会论文汇编[C];2011年

9 沈哲旎;李丽华;屈艺;母德志;;新生大鼠缺血缺氧脑病模型中VEGF表达的改变[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

10 芦惠;薛辛东;;基质金属蛋白酶2，9在新生鼠肠损伤的动态表达及意义[A];浙江省医学会围产医学分会成立大会暨“围产医学热点问题”学术会议论文汇编[C];2008年

相关重要报纸文章 前7条

1 白毅;中科院生物物理所发现T细胞数目参与调节天然免疫反应[N];中国医药报;2008年

2 北京大学基础医学院 周春燕;活体心脏带给我们什么[N];健康报;2008年

3 ;2000～2001年度冶金科学技术奖二等奖介绍(04)[N];世界金属导报;2002年

4 记者王俊鸣;用骨髓干细胞可使盲鼠复明[N];科技日报;2002年

5 齐继成;褪黑激素风靡美国[N];医药经济报;2001年

6 ;全反式维甲酸促进造血干／祖细胞植入的实验研究[N];中国医药报;2003年

7 记者 顾钢;实验鼠睾丸细胞成功转换为胚胎干细胞[N];科技日报;2009年

相关博士学位论文 前10条

1 金冬梅;新生SD大鼠实验性缺氧缺血脑组织内源性神经干细胞增殖及BRCA1基因的调控作用研究[D];四川大学;2006年

2 严彩霞;肠三叶因子对新生鼠NEC模型PI3K/AKT信号通路的影响及意义[D];武汉大学;2011年

3 武辉;围产期缺氧缺血性脑损伤神经细胞凋亡、胶质细胞病理及妥泰对其脑保护作用的研究[D];吉林大学;2004年

4 何平;新生鼠窒息致心肌损伤及相关因素影响的实验研究[D];昆明医学院;2010年

5 于立君;亚低温对新生鼠缺氧缺血脑损伤的能量代谢的作用[D];复旦大学;2003年

6 王菊莉;新生大鼠HIBD晚期神经细胞凋亡及bFGF对其影响[D];中国医科大学;2003年

7 王纪文;反复新生期大鼠痫性发作对神经发生的影响及其远期后果[D];山东大学;2005年

8 张素玲;高氧致新生鼠肺VEGF、VEGFRs、HIF-1α、ANG-1、TIE-2及PECAM-1动态改变的实验研究[D];中国医科大学;2005年

9 芦惠;氧化应激、一氧化氮合酶及表皮生长因子在新生鼠肠损伤中的动态变化及机制研究[D];中国医科大学;2005年

10 冯雪;新生鼠实验性缺氧缺血性损伤脑组织MCP-1及其受体CCR2的表达与小胶质细胞活化规律的研究[D];四川大学;2005年

相关硕士学位论文 前10条

1 张雨平;Caspase-3抑制剂抗新生鼠缺氧缺血脑损伤实验研究[D];第三军医大学;2003年

2 李维超;新生大鼠缺氧缺血脑损伤caspase-3mRNA的表达变化及1，6-二磷酸果糖的神经保护机制研究[D];天津医科大学;2004年

3 冀红;血管内皮生长因子基因治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究[D];大连医科大学;2003年

4 徐雅丽;维甲酸下调结缔组织生长因子表达减轻新生鼠高氧肺损伤[D];重庆医科大学;2011年

5 李潜;锂剂对新生鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用及其机制[D];郑州大学;2010年

6 张巧凤;AQP1及α-ENaC基因及蛋白在高氧致肺损伤新生鼠中动态变化[D];中国医科大学;2010年

7 宋纪国;高氧诱导肺损伤新生鼠肺表面活性蛋白基因表达的研究[D];重庆医科大学;2010年

8 周中成;双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎模型肠损伤保护机制的研究[D];苏州大学;2010年

9 徐洪涛;新生鼠高浓度氧肺损伤机制及临界值的研究[D];第三军医大学;2003年

10 黄英;I～（125）-NGF在缺氧新生鼠脑内的吸收分布[D];吉林大学;2005年

本文编号：2812049