尿液N-乙酰天门冬氨酸定量分析方法的建立及其在Canavan病诊断中的意义

发布时间：2020-09-11 10:32

　　 目的 1.通过气相色谱质谱(Gas chromatography-Mass spectrometry,GC-MS)联用分析方法建立定量尿液N-乙酰天门冬氨酸(N-Acetyl Aspartic acid, NAA)的方法,并探讨在筛查和诊断Canavan病(Canavan disease,CD)中的意义。 2.比较SCAN和SIM两种离子扫描模式在定量检测尿中NAA的差异和意义。 方法 1.对尿液NAA进行GC-MS定量分析。 2.取100ul尿液,加入100ul内标物正十七烷酸,采用尿素酶法进行样本前处理。 3.应用内标法建立尿液中NAA的定量标准曲线。 4.对尿液中NAA定量分析方法的线性范围、线性相关系数、精密度、回收率和定量下限进行方法学评价。 5.测定正常健康对照组尿液中NAA的浓度范围。 6.对2009年-2010年由欧洲遗传代谢病筛查诊断中心提供的CD室间质控(ERNDIM External Quality Assurance (EQA) schemes )尿液样品进行检测。 7.标准曲线的拟定、方法学的评价、正常健康对照组尿液中的NAA浓度范围以及室间阳性质控尿液样品中NAA的浓度都分别采用GC/MS分析方法中的SCAN和SIM离子扫描模式进行检测分析。 8. GC/MS分析方法中的SCAN和SIM离子扫描模式在NAA定量中的线性范围、线性相关系数、精密度、回收率、定量下限等的比较和意义。 结果 1. NAA衍生化后在色谱图中会出现NAAdi- TMS和NAAtri-TMS两种形式,其保留时间分别为17.008min和17.249min。采用GC/MS分析方法的SCAN离子扫描模式时,NAA在10～1000μg/ml内线性相关系数在0.9956,批内精密度为5.4%～12.15%,批间精密度为5.82%～10.43%,稳定性及重复性好。100ug/ml及1000ug/ml两个浓度回收率分别为87%及95%,准确性高,但是10ug/ml时回收率为180%,准确性下降。定量下限为10ug/ml。正常健康对照组尿液中的NAA浓度范围是48.88±17.2umol/mmolCr(mean±2SD)。用该方法检测欧洲遗传代谢病筛查诊断中心提供的CD室间质控尿液标本,检出浓度均在其95%的置信区间内。 2.比较GC/MS分析方法中使用SCAN和SIM离子扫描模式在定量NAA时的差异:采用GC/MS分析方法的SIM离子扫描模式时,NAA在1～1000μg/ml内线性相关系数在0.9984,批内精密度为2.49%～7.96%,批间精密度为4.28%～8.79%,稳定性及重复性较SCAN离子扫描模式好。10ug/ml、100ug/ml及1000ug/ml三个浓度回收率分别为110%、90.03%及108%,定量低浓度NAA时准确性较SCAN离子扫描模式高。正常健康对照组的尿液NAA浓度范围是8.67±7.88umol/mmolCr(mean±2SD)。用该方法检测欧洲遗传代谢病筛查诊断中心提供的CD室间质控尿液标本,检出浓度均在其95%的置信区间内。 结论 1.通过GC-MS建立了快速、敏感及准确地定量检测尿液中NAA的分析方法,符合欧洲质控标准,为筛查及诊断CD提供了参考和依据。 2. GC/MS分析方法的SIM较SCAN离子扫描模式更为稳定,重复性更好,定量更准确,在低浓度时可对NAA作更准确的定量。
【学位单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R725.8

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本文编号：2816560