MLPA技术在发热相关惊厥患儿SCN1A基因研究中的应用

发布时间：2020-09-27 07:48

　　热性惊厥(febrile seizure, FS)是小儿神经系统最为常见的疾病之一。热性惊厥在儿童中发病率约为2%-5%,发病高峰年龄为6月-3岁,有明显的年龄依赖性及家族遗传特征,大多数热性惊厥患儿6岁以后停止发作。电压门控性钠离子通道在神经元动作电位的产生和扩散中起到重要的作用。电压门控性钠离子通道α1亚单位基因(voltage-gated sodium channel alpha 1 subunit gene, SCN1A)是目前临床上与癫痫最为相关的基因,其定位于第2条染色体长臂2q24.3。在5%-10%的全面性癫痫伴热性惊厥附加症(generalized epilepsy with febrile seizures plus, GEFS+)家系和33%-82%的婴儿严重肌阵挛癫痫(severe myoclonic epilepsy in infancy, SMEI)患儿中检测到SCN1A基因点突变。后来的研究检测经直接测序没有发现SCN1A基因点突变的SMEI患儿的SCN1A基因,发现15%-20%有SCN1A基因的数个外显子或全部外显子缺失。在以前的研究中利用变性高效液相色谱技术(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)和/或直接测序等方法在热性惊厥患儿中未检测到SCN1A基因点突变,本研究利用多重连接依赖性探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)检测发热相关惊厥患儿SCN1A基因缺失或重复突变。目的探讨发热相关惊厥的临床特点及其与电压门控性钠离子通道α1亚单位基因(SCN1A)基因的关联,进一步探讨SCN1A基因与热性惊厥相关癫痫综合征的联系。方法 1.对在山东大学齐鲁医院就诊的54例发热相关惊厥患儿,收集其临床资料,抽取其静脉血并提取基因组DNA。2.采用多重连接依赖式探针扩增技术对54例发热相关惊厥患儿及正常对照的SCN1A基因进行检测。3.使用Coffalyser Version 9.4软件进行计算,与正常人SCN1A基因外显子比对,0.7提示外显子有缺失,1.3提示外显子有重复；逐一计算54例发热相关惊厥患儿26个外显子的比值。结果根据患儿临床资料及脑电图检查,对发热相关惊厥患儿临床特点(年龄、性别、发作类型、初发年龄、发作次数等)进行总结分析；54例发热相关惊厥患儿,其中热性惊厥患者34例,单纯性热性惊厥29例,复杂性热性惊厥5例；癫痫有热性惊厥史20例；所有发热相关惊厥患儿DNA均利用MLPA技术进行SCN1A基因检测,经Coffalyser Version 9.4软件进行比对计算后,其数值在0.7-1.3之间,提示54例发热相关惊厥患儿均未发现SCN1A基因外显子缺失或重复。结论 1.MLPA作为一种新的基因突变检测方法,区别于传统的基因突变检测方法,其可检测基因大片段的缺失或重复,给癫痫的分子遗传学研究开拓了新的思路。 2.在34例热性惊厥患儿和20例癫痫有热性惊厥史患儿中未发现SCN1A基因外显子的缺失或重复,SCN1A基因外显子的缺失或重复可能不是一般热性惊厥的潜在病因。结合以前的研究,提示SCN1A基因与一般热性惊厥的发病可能不相关。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2011
【中图分类】：R720.597
【部分图文】：

探针反应,检测结果,外显子

图1MLPA探针反应检测结果A:正常儿童MLPA一SCNIA探针反应各外显子峰;B:1例FS患儿MLPA一SCNIA探针反应各外显子峰。F19.1DeteetionresultsofMLPAProbereaetionA:ThePeakofeaehPeakofeaeheX0nB:TheCXOnofMLPA一SCN1AProbereactionofnorma1control:ofMLPA一SCNIAProbereactionofFSPatient.

【参考文献】