Wilson病患儿ATP7B基因外显子突变研究

发布时间：2020-09-28 16:42

　　 背景Wilson病(Wilson Disease, WD),又称肝豆状核变性病(Hepatolenticular degeneration,HLD),是由于ATP7B基因缺陷引起铜代谢异常的常染色体隐性遗传病,以不同程度的肝损害、脑退行性变和角膜边缘铜盐沉着环为临床特征,ATP7B基因位于13q14.3,含个21外显子,编码一种P型铜转运ATP酶。肝豆状核变性是由于ATP7B基因突变,使ATP酶功能丧失,多余的铜不能清除而在肝脏、大脑大量沉积而出现肝病和神经系统症状。本病临床表现多种多样,易造成漏诊和误诊,早期诊断、早期治疗可以在一定程度上预防和逆转临床症状。ATP7B基因突变分散在基因各个部位,迄今为止已发现500多种ATP7B基因外显子突变类型。 目的探讨肝豆状核变性ATP7B基因诊断的方法和意义,以及肝豆状核变性患者基因型和临床表型之间的关系。 方法提取7例临床诊断为肝豆状核变性的患儿外周血基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)对肝豆状核变性ATP7B基因的21个外显子进行扩增,运用DNA直接测序法检测是否存在突变,并分析WD患者的临床特点。 结果7例患者中,1例患者在第2外显子检测到918_919insC纯合突变,以肝肾损害为主要表现,该突变未见报道;1例患者检测到第8外显子C2332T杂合突变,表现为严重肝损害和溶血性贫血,该突变未见国内报道;1例患者检测到第12外显子C2804T纯合突变,以肝损害表现为主,症状较轻。6例者均发现存在基因多态现象,共四种:T1216G、G1366C、G2855A,T3419C。 结论C2332T与918_919insC突变与肝肾损害有关。C2804T是症状较轻的温和突变。918_919insC在国内外未见报道。未见突变的患者不能排除WD,突变可能位于内含子或其他区域。DNA直接测序法可作为WD患者的基因诊断方法。
【学位单位】：广州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R742.4
【部分图文】：

离子到细胞膜的表面。（3）疏水区为 6 个跨膜螺旋区和 1 个亲媒性区，穿插于整个多肽链中。ATP7B 蛋白位于反面高尔基网，主要功能是调节铜代谢平衡(1)将肝细胞内过多的铜转运到分泌途径，排入胆道;(2)转运铜离子与前铜蓝蛋白结合，使之成为成熟的全铜蓝蛋白。ATP7B 的 6 个铜离子结合区接受铜伴侣蛋白传递的铜后，发生构 象 改 变 ， 此 时 该 酶 的 主 要 生 理 功 能 就 是 定 向 引 导 铜 与 铜 蓝 蛋 白 前 体(apro-ceruloplasmin)结合，形成铜蓝蛋白（holo-ceruloplasmin)，铜蓝蛋白通过血浆分泌进入血循环，将铜运送到各组织脏器；如果铜经饮食吸收过多，结合到 ATP7B 铜结合区的铜数量增多，铜结合区的构象改变，导致 ATP7B 定位于另一个新的位置，进入高尔基体形成的大泡，然后该酶利用水解 ATP 释放能量，促使铜离子完成跨膜转运过程，将大泡腔内的铜经肝细胞膜排入胆汁，再通过胆汁由粪便排出多余的铜，这时 ATP7B 再回到高尔基体，这是铜排泄的正常生理途径（见图 2）[20]。因此 ATP7B 对维持细胞内铜离子平衡，维持正常的铜代谢具有重要作用。

离子到细胞膜的表面。（3）疏水区为 6 个跨膜螺旋区和 1 个亲媒性区，穿插于整个多肽链中。ATP7B 蛋白位于反面高尔基网，主要功能是调节铜代谢平衡(1)将肝细胞内过多的铜转运到分泌途径，排入胆道;(2)转运铜离子与前铜蓝蛋白结合，使之成为成熟的全铜蓝蛋白。ATP7B 的 6 个铜离子结合区接受铜伴侣蛋白传递的铜后，发生构 象 改 变 ， 此 时 该 酶 的 主 要 生 理 功 能 就 是 定 向 引 导 铜 与 铜 蓝 蛋 白 前 体(apro-ceruloplasmin)结合，形成铜蓝蛋白（holo-ceruloplasmin)，铜蓝蛋白通过血浆分泌进入血循环，将铜运送到各组织脏器；如果铜经饮食吸收过多，结合到 ATP7B 铜结合区的铜数量增多，铜结合区的构象改变，导致 ATP7B 定位于另一个新的位置，进入高尔基体形成的大泡，然后该酶利用水解 ATP 释放能量，促使铜离子完成跨膜转运过程，将大泡腔内的铜经肝细胞膜排入胆汁，再通过胆汁由粪便排出多余的铜，这时 ATP7B 再回到高尔基体，这是铜排泄的正常生理途径（见图 2）[20]。因此 ATP7B 对维持细胞内铜离子平衡，维持正常的铜代谢具有重要作用。

ATP7B基因21个外显子23个片段2%琼脂糖凝胶电泳图

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 邱晓云，卢大儒;内含子在基因表达调控中的作用[J];国外医学.遗传学分册;1996年01期

2 冯凯;许贤豪;吕宪民;孟晓梅;谢琰臣;张华;殷健;;肝豆状核变性的早期临床表现及误诊分析[J];脑与神经疾病杂志;2005年06期

3 黄丽素;刘晓青;张雅芬;李进;;肝豆状核变性ATP7B基因启动子区域的分子特征[J];实用儿科临床杂志;2007年20期

4 刘晓青,张建明,顾学范,吴洁,张雅芬,薛和平,许燮萍,鲍克容,陈瑞冠;Wilson病ATP7B基因Arg778Leu突变与临床表型之相关性探讨[J];中华儿科杂志;1999年06期

5 王柠,吴志英,林珉婷,慕容慎行;应用限制性酶谱分析法快速检出Wilson病基因突变热点[J];中华神经科杂志;1999年05期

6 梁秀龄,马少春,徐评议;肝豆状核变性病基因突变的检测及酶切诊断方法[J];中华神经科杂志;2000年03期

7 黄帆,梁秀龄,王莹,徐评议,杨春水,阎振文;肝豆状核变性基因Arg778Leu突变与临床表现关系研究[J];中华神经科杂志;2000年05期

8 吴志英,王柠,林珉婷,方玲,慕容慎行;Wilson病基因全长外显子的突变检测和分析[J];中华神经科杂志;2001年03期

9 赵鹏,张本恕;载脂蛋白E基因型对肝豆状核变性发病年龄的影响[J];中华神经科杂志;2005年08期

10 许月芳,范玉新,余龙,江萤,杨任民,韩咏竹,崔映宇,任明山,赵寿元;PCR直接测序在Wilson病基因第8外显子检出一个突变热点[J];中华医学遗传学杂志;1998年05期

本文编号：2829016