慢性肾衰幼年大鼠肾小管上皮细胞转分化的分子表型及干预研究

发布时间：2020-10-12 04:08

　　 目的探讨5/6肾切除残肾慢性肾衰幼年大鼠慢性进展性肾小管间质损伤过程中,转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达趋势以及其介导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)过程中相关蛋白成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的动态表达趋势,并观察给予血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素受体阻断剂(ARB)干预治疗的影响。 方法96只3~4周龄幼年雌性SD大鼠,随机将其分为假手术组(n=32)、5/6NX未干预组(n=32)和5/6NX干预组(n=32),采用5/6肾切除法制备残肾慢性肾衰模型,于手术完成后,经测定大鼠肾功能及肾脏病理以评价模型是否成功。5/6NX干预组于模型成功后给予ACEI+ARB联合灌胃。分别于第2、4、8、12周末,每组随机选8只大鼠,于内眦静脉采血测血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN);处死动物,取出肾组织,同时处死假手术组大鼠,取出肾组织;石蜡切片,HE染色观察肾小管间质损害及纤维化程度;免疫组化法检测肾小管上皮细胞TGF-β1、E-cadherin、FSP-1、α-SMA和vimentin等各目标蛋白质分子的表达。 结果 ⑴HE染色显示:假手术组大鼠肾组织无明显变化;5/6NX未干预组大鼠随着实验时间的延长,肾小管间质病变日趋明显,表现为组织中炎性细胞(主要为单核细胞)浸润,肾小管上皮细胞肿胀,肾小管塌陷及肾小管间隙加宽,并进行性形成纤维化病变;5/6NX干预组大鼠小管间质病变则相对减轻。 ⑵免疫组化染色半定量积分值显示:5/6NX未干预组和干预组大鼠肾小管上皮细胞E-cadherin的表达随着实验时间的延长而逐渐减少,各时间点与假手术组比差异具有统计学意义(P0.05),第8与12周,干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05);而FSP-1、vimentin的表达逐渐增加,均较同期假手术组有显著差异(P0.05),除第2周外,各时间点干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05);同时,α-SMA的表达量也逐渐增加,除第2周外,各时间点5/6NX未干预组和干预组α-SMA与假手术组比差异具有统计学意义(P0.05),第8与12周干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05);TGF-β1的表达量逐渐增加,除第2周外,各时间点5/6NX未干预组和干预组TGF-β1蛋白的表达量与假手术组比差异具有统计学意义(P0.05),除第2周外,干预组蛋白表达量与未干预组比差异具有统计学意义(P0.05)。 结论5/6肾切除残肾慢性肾衰幼年大鼠在其肾损伤过程中前致纤维化因子TGF-β1表达呈逐渐上调趋势,其介导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)相关标志蛋白FSP-1、α-SMA和vimentin的表达同步上调,而E-cadherin的表达呈下降趋势,给予ACEI和ARB干预后可逆转这些相关蛋白分子的表达趋势。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R726.9
【部分图文】：

各组大鼠肾组织TGF-β1蛋白表达随时间的变化

脏层、壁层上皮细胞也有表达，而间质、血管无表达；5/6NX 未干预组大鼠，随着病程延长和肾脏病变的加重，E-cadherin 蛋白表达趋于下调，免疫组化阳染信号减弱，组内时间点比较具有统计学意义（P<0.05）；而 5/6NX 干预组大鼠残肾组织 E-cadherin 蛋白表下降程度较未干预组明显改善，组内各时间点比较具有统计学意义（P<0.05）。各时间5/6NX 未干预组 E-cadherin 蛋白表达量与假手术组比较具有统计学意义（P<0.05）；第 12 周 5/6NX 干预组 E-cadherin 蛋白表达量与未干预组比较具有统计学意义（P<0.05）。见图 3、表 4、直条图 4、线图 2。表 4 各组大鼠不同时间点肾组织 E-cadherin 表达免疫组化半定量值分析 （ x ± s)鼠数 第2周(%) 第4周(%) 第8周(%) 第12周(%) F值 P值假手术组 8 2.85±0.19 3.02±0.11 2.95±0.19 2.92±0.15 1.20 0.335/6NX未干预组 8 2.45±0.34 1.92±0.68 1.67±0.17 0.91±0.41 12.64 0.005/6NX干预组 8 2.54±0.14 2.34±0.44 2.23±0.14 1.80±0.62 3.77 0.02F值 4.29 9.50 85.07 31.53P值 0.03 0.00 0.00 0.00注＊表示与假手术组比较,P<0.05； 表示 5/6NX 干预组与 5/6NX 未干预组比较, P<0.05。

线图 2 各组大鼠肾组织 E-cadherin 表达随时间的变化3.3 肾组织各时段 FSP-1 免疫组化染色假手术组大鼠肾组织 FSP-1 有轻微的表达，组内各时间点比较无统计学意义；5/6N未干预组大鼠残肾组织 FSP-1 蛋白表达的阳性信号随病程的延长及病情的加重，阳染信逐渐增强，主要见于肾间质中，组内各时间点比较具有统计学意义（P<0.05）；而 5/6N干预组大鼠残肾组织 FSP-1 蛋白表达上调趋势较未干预组明显改善，组内各时间点比较有统计学意义（P<0.05）。各时间点 5/6NX 未干预组与假手术组比较具有统计学意（P<0.05）；第 4、8 与 12 周 5/6NX 干预组 FSP-1 蛋白表达量与未干预组比较具有统计意义（P<0.05）。见附图 4、表 5、直条图 5、线图 3。表 5 各组大鼠各时间点肾组织 FSP-1 蛋白表达免疫组化半定量分析（ x ± s)鼠数 第2周(%) 第4周(%) 第8周(%) 第12周(%) F值 P值假手术组 8 1.56±0.14 1.53±0.17 1.54±0.13 1.55±0.10 0.05 0.95/6NX未干预组 8 1.77±0.08 2.30±0.22 3.08±0.12 3.23±0.17 114.47 0.05/6NX干预组 8 1.66±0.13 1.99±0.18 2.35±0.15 2.82±0.17 59.96 0.0F值 4.59 25.15 196.89 209.40
【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 董波,黄定九,李慧丽,向祖琼;血管紧张素II对单核细胞趋化因子及粘附分子表达的影响[J];上海免疫学杂志;2002年02期

2 马宏,王翠玲;血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素受体阻断剂对残肾慢性肾衰竭幼鼠肾小球硬化的影响[J];中华儿科杂志;2000年05期

3 楚非,邹万忠,孙锁柱,韩志惠,王盛兰;大鼠肾小管间质纤维化中肾小管上皮细胞表型转化的研究[J];中华肾脏病杂志;2003年01期

4 陈香美,师锁柱,李文歌,傅博,张颖,程庆砾;血管紧张素 Ⅱ1A 受体在大鼠肾间质损伤的表达及转换酶抑制剂的调节作用[J];中华医学杂志;1997年04期

本文编号：2837617