异丙酚在幼鼠肝缺血再灌注后脑损伤中的作用

发布时间：2020-10-12 15:30

　　 目的:评价异丙酚在肝缺血再灌注(HIR)诱导的海马损伤的作用以及线粒体自噬在该过程该过程中所起的作用。方法:清洁级的健康的雄雌不分的C57/BL小鼠40只,周龄2周,体重6~8g,随机数表法分为4组(n=10):假手术组(S组)、肝缺血/再灌注组(IR组)、异丙酚组(P组),和异丙酚+自噬抑制剂(3-甲基腺嘌呤,3-MA)组(3-MA组)。采用夹闭肝左叶、中叶脉管(门脉、动脉与胆道)的共干的方法制备70%肝缺再灌注损伤模型。S组仅开腹、游离第一肝门以及1小时后关腹等操作,无血管夹闭,IR组按上述方法制备70%肝缺再灌注损伤模型,P组于造模前30 min腹腔注射异丙酚30 mg/kg;3-MA组造模前1h时腹腔注射3-MA5 mg/kg,30 min后腹腔注射异丙酚50μg/kg,S、和IR组在开腹前30min腹腔内注射等量乳化剂。各组小鼠于再灌注后6h通过眼球取血后处死小鼠,取海马组织。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定脑损伤标志物:神经元特异性烯醇化酶(NSE)和酸性结合蛋白(S100β)。取海马组织,制备10%组织匀浆,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性。采用免疫组化的方法检测各小组海马组织的小胶质细胞活化情况。通过TUNEL法评估海马神经元细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数(AI)。采用透射电子显微镜(TEM)观察各组小鼠海马组织线粒体自噬和线粒体的超微结构。使用蛋白质免疫印迹(Western blot)分析评估LC3II/I,BNIP3L/NIX和p62的表达。结果:与S组相比,IR组,P组,3-MA组脑损伤标志物NSE和S-100β水平均升高,海马组织中MDA含量上升,SOD活性下降,小胶质细胞活化水平增高,AI上升,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量均提高,伴随p62蛋白含量的下降(P0.05)。与IR组相比,P组脑损伤标志物NSE和S-100β水平明显下降,海马组织中MDA含量下降,SOD活性上升,小胶质细胞活化水平和AI下降,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量进一步提高,伴随p62蛋白含量的进一步下降,3-MA组脑损伤标志物NSE和S-100β水平进一步升高,海马组织中MDA含量上升,SOD活性下降,小胶质细胞活化水平和AI上升,LC3II/I,BNIP3L/NIX蛋白含量均提高,伴随p62蛋白含量的下降(P0.05)。TEM观察,S组海马组织线粒体结构完整,线粒体自噬较少。与S组相比,IR组,P组,3-MA组线粒体数量均有所下降,且线粒体形态结构紊乱,线粒体肿胀增加,自噬小体增多,与IR组相比,P组线粒体数量增多,线粒体结构较完整,线粒体自噬小体数量增多,3-MA组的线粒体数量下降明显,且线粒体形态结构紊乱,线粒体肿胀进一步增加,自噬小体减少。结论:1.异丙酚可减轻幼鼠肝缺血再灌注后海马组织的氧化应激反应和细胞凋亡。2.异丙酚减轻幼鼠肝缺血再灌注后海马损伤的机制与激活线粒体自噬相关。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R726.9
【部分图文】：

具有统计学意义。2 结果2.1 脑损伤标志物 NSE 和 S100β与 S 组相比，IR 组，P 组，3-MA 组血清中脑损伤标志物 NSE 和 S100β均有所增加（P<0.05），与 IR 组相比，P 组的血清中脑损伤标志物 NSE 和 S100β下降（P<0.05），3-MA 组脑损伤标志物 NSE 和 S100β水平上升。见表 1 和图 1 。表 1 血清 NSE、S100β浓度的比较（n=10， x ± s）组别 NSE（ng/mL） S100β（mg/mL）S 组 9.74±0.72 1.34±0.06IR 组 31.33±2.34a2.06±0.13aP 组 20 .09±1.26ab1.73±0.08ab3-MA 26.52±2.73ab2.23±0.22ab与 S 组比较 ，aP<0.05；与 IR 组比较，bP<0.05。

天津医科大学硕士学位论文与 S 组比较，IR 组，P 组，3-MA 组的 MDA 含量显著升高，SOD 活性降低（P＜0.05）；与 IR 组比较，P 组的 MDA 含量显著降低，SOD 活性升高，3-MA组的 MDA 含量显著升高，SOD 活性降低（P＜0.05）。见表 2 和图 2。表 2 海马组织 MDA 含量及 SOD 活性的比较（n=5， ±s）组 别 MDA(mmol/mg) SOD(U/mg)S 组 58.99±5.04 230.1±18.03IR 组 130.90±8.92a177.4±6.68aP 组 89.26±3.64ab202.8±9.72ab3-MA 组 164.4±12.59ab167.8±6.25ab与 S 组比较 ，aP<0.05；与 IR 组比较，bP<0.05。

图 3：海马组织小胶质细胞活化情况（×200）2.4 海马神经元凋亡TUNEL 检测海马神经元凋亡，凋亡细胞核显示为红色荧光，细胞核显示为DAPI 蓝色荧光染色。结果表明，与 S 组相比，IR 组，P 组，3-MA 组的细胞凋亡的程度明显加重，各组海马组织，每个切片各取 5 个高倍视野下算出的细胞凋亡指数均有所增加（P<0.05）；与 IR 组相比，P 组的细胞凋亡情况明显，细胞凋亡指数下降，3-MA 组的细胞凋亡则反而加重，细胞凋亡指数上升（P<0.05）。见图 4、图 5
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 肖建生,叶启发;肝缺血再灌注对细胞周期的影响[J];中国现代医学杂志;2002年08期

2 褚延魁,马庆久,刘维,鲁建国,何显力,杜锡林,乔庆,王胜智,赵华栋;肝缺血再灌注与胃粘膜病理损伤[J];第四军医大学学报;2002年21期

3 孙经建;热休克蛋白70与肝缺血再灌注[J];国外医学(创伤与外科基本问题分册);1996年02期

4 江平,刘志苏;赖氨匹林对肝缺血再灌注细胞核因子κB的影响[J];武汉大学学报(医学版);2003年03期

5 陈卫东,赵一兵,嵇振岭,陈怀仁;肝缺血再灌注前后ICAM-1在肝窦内皮细胞表达的变化及意义[J];江苏医药;2002年12期

6 朱兴国,李德春,刘继明,张学光;肝缺血再灌注中相关酶的变化[J];苏州医学院学报;2000年04期

7 孙经建，吴孟超，张柏和，陈汉，钱光相;间断和持续肝缺血再灌注后线粒体功能的改变[J];肝胆外科杂志;1996年01期

8 赵一兵,嵇振岭;肝缺血再灌注时肠道损伤对肝脏损伤的影响[J];铁道医学;2001年04期

9 孙经建,吴孟超,陈汉,钱光相;热休克蛋白70在肝缺血再灌注时的诱导[J];中华肝胆外科杂志;1999年03期

10 刘仁贵;杨继武;秦燕;苏娟;;参麦与葛根素注射液联合应用对肝缺血再灌注早期损伤的影响[J];临床医药实践;2012年03期

相关博士学位论文 前1条

1 褚延魁;肝缺血再灌注、肝移植与胃粘膜损伤[D];第四军医大学;2002年

相关硕士学位论文 前10条

1 于向洋;Src-PSD95-NR2A信号模块在肝缺血再灌注相关海马损伤中的作用[D];天津医科大学;2019年

2 吕景淑;异丙酚在幼鼠肝缺血再灌注后脑损伤中的作用[D];天津医科大学;2019年

3 殷阔琦;丙泊酚对幼鼠肝缺血再灌注致脑损伤时NR2B/CaMKⅡα信号通路的影响[D];天津医科大学;2019年

4 朱兴国;白细胞介素-8在肝缺血再灌注中的作用[D];苏州大学;2001年

5 管小萌;七氟醚预处理对大鼠肝缺血再灌注诱发肺损伤的影响[D];新疆医科大学;2016年

6 付彧;抑制枯否细胞可以减轻肝缺血再灌注引起的肾损伤[D];中国医科大学;2010年

7 王晓琳;乌司他丁对肝缺血再灌注后急性肝肺损伤的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年

8 韩建国;肝缺血再灌注后CD54等细胞因子的表达及其意义[D];青岛大学;2007年

9 段佳佳;肝缺血再灌注后HSP70 mRNA和蛋白的表达及其与凋亡关系的临床研究[D];广西医科大学;2008年

10 杜秋国;丹参预处理对大鼠肝缺血再灌注时葡萄糖调节蛋白78/94表达的影响[D];南方医科大学;2013年

本文编号：2837959