运动康复训练对大鼠缺氧缺血性脑损伤后学习记忆的影响及可能机制研究

发布时间：2020-10-23 07:54

　　 第一部分新生鼠缺氧缺血脑损伤模型的建立和验证 目的:成功建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型并予以验证。 方法:选7日龄SD大鼠32只,分为假手术组和缺氧缺血脑损伤模型(HIBD)组。HIBD组大鼠经乙醚麻醉后结扎左侧颈总动脉,置于缺氧箱内持续通入8%的氮氧混合气体2 h进行缺氧缺血干预;假手术组只游离而不结扎左侧颈总动脉,亦不予缺氧处理。于缺氧结束后即刻观察行为学改变,24 h后进行感觉运动神经反射评定,随即断头取脑行TTC染色观察脑组织缺氧缺血梗死灶,各组剩余大鼠于缺氧结束4 w后断头取脑进行HE染色观察海马组织病理改变。 结果:与假手术组相比,HIBD组大鼠缺氧24 h后均有不同程度的异常行为学表现,其翻正反射、悬崖回避反射和趋地性反射均较假手术组明显延迟。脑组织切片TTC染色显示HIBD组大鼠皮层和皮层下脑组织出现面积不等的梗死灶,而假手术组大鼠未见确切梗死灶。缺氧4 w后行病理学检查显示HIBD组大鼠建模侧大脑半球体积较对侧半球缩小,并伴有液化和空洞的形成,H.E.染色后光镜检查发现HIBD组大鼠建模侧海马CA1区出现大量变性和坏死的神经元,胶质细胞增生,细胞排列结构紊乱;而假手术组大鼠脑组织肉眼及镜下观察均未见明显异常。 结论:本实验采用Rice-Vannucci法成功的建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型。 第二部分运动康复训练对大鼠缺氧缺血性脑损伤后学习记忆的影响及可能机制研究 目的:探讨运动康复对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑结构和空间学习记忆的影响。 方法:7日龄SD大鼠随机分为假手术组、HIBD非运动组及HIBD运动组。HIBD运动组于建模2 w后开始连续4 w的运动康复。而后通过神经功能评分和Morris水迷宫检测各组大鼠运动功能和空间学习记忆能力,称取双侧大脑半球重量,H.E.染色后光镜下计数海马CA1区存活神经元数目,透射电镜观察海马突触超微结构,最后通过免疫组织化学方法检测海马磷酸化CaMKII及BDNF表达水平。 结果:运动康复4 w后HIBD运动组大鼠神经功能评分(0.46±0.18)和假手术组大鼠评分(0.50±0.36)均明显优于HIBD非运动组(1.04±0.33) ,HIBD运动组与假手术组间无统计学差异。在各测试时间点HIBD非运动组大鼠水迷宫平均寻台潜伏期均较HIBD运动组和假手术组长,穿越平台次数(2.62±0.74次)较HIBD运动组(5.25±0.98次)和假手术组(4.62±1.19次)少,HIBD运动组和假手术组间平均寻台潜伏期及穿越平台次数无统计学差异。脑重测定示HIBD非运动组、HIBD运动组大鼠左侧平均脑重均低于假手术组(0.68±0.04 g) ,HIBD非运动组(0.46±0.02 g)又低于HIBD运动组(0.63±0.06 g) ;三组大鼠右侧平均脑重间无统计学差异。H.E.染色观察示HIBD非运动组大鼠左侧海马出现大量变性坏死的神经元,HIBD运动组大鼠左侧海马亦可见变性坏死神经元,但程度较HIBD非运动组减轻,假手术组左侧海马未见明显异常;HIBD非运动组和HIBD运动组大鼠左侧海马CA1区400倍光镜下平均每视野存活神经元数目均较假手术组(63.0±8.5个)明显减少,HIBD非运动组(47.1±6.32个)又较HIBD运动组(56.1±11.56个)少。此外,透射电镜示HIBD非运动组大鼠左侧海马突触前膜囊泡减少,突触间隙增宽,突触后致密物变薄,HIBD运动组和假手术组左侧海马突触结构未见明显异常。最后,免疫组化结果显示HIBD运动组大鼠左侧海马CA1区磷酸化CaMKII平均光密度值(0.2833±0.0208)和假手术组磷酸化CaMKII平均光密度值(0.2988±0.0196)均明显高于HIBD非运动组(0.2259±0.0201) ,HIBD运动组与假手术组间无统计学差异。而HIBD运动组、HIBD非运动组大鼠左侧海马CA1区BDNF平均光密度值均较假手术组(0.1363±0.0078)高,HIBD运动组(0.2352±0.0151)又明显高于HIBD非运动组(0.1788±0.0092)。 结论:HIBD运动组大鼠空间学习记忆能力明显优于HIBD非运动组,同时其海马CA1区磷酸化CaMKII和BDNF表达水平均明显高于HIBD非运动组,提示运动康复通过上调海马区磷酸化CaMKII和BDNF表达水平来促进缺氧缺血脑损伤后大鼠海马神经元存活,增强突触结构可塑性,改善受损的空间学习记忆能力。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R722.12
【部分图文】：

注：与假手术组相比，*：P < 0.01。图 2：各组大鼠缺氧缺血 24 h 后悬崖回避反射时间 ( x ± SD)Graph 2 Cliff aversion reflex performance in rats subjected to hypoxic-ischemic insurats subjected to a sham-operation ( x ± SD)新生鼠HIBD模型的验证悬崖回避反射验证HIBD新生鼠模型悬崖回避反射024681012假手术组 HIBD组时崖回避反射悬间（单位：秒）a注：a：P < 0.01, 与假手术组相比024681012悬回避崖射反间时(位单：秒)*

图 1-1 假手术组大鼠脑片 TTC 染色Fig1-1 TTC staining of brain slice of rats in controlgroup图 1-2 HIBD 组大鼠脑片 TTC 染色Fig1-2 TTC staining of brain slice of rats in HIBgroup图 1-3 假手术组大鼠大脑大体解剖Fig1-3 Cerebral hemispheres of rats in control group图 1-4 HIBD 组大鼠大脑大体解剖Fig1-4 Cerebral hemispheres of rats in HIBD group

图 1-1 假手术组大鼠脑片 TTC 染色Fig1-1 TTC staining of brain slice of rats in controlgroup图 1-2 HIBD 组大鼠脑片 TTC 染色Fig1-2 TTC staining of brain slice of rats in HIBgroup图 1-3 假手术组大鼠大脑大体解剖Fig1-3 Cerebral hemispheres of rats in control group图 1-4 HIBD 组大鼠大脑大体解剖Fig1-4 Cerebral hemispheres of rats in HIBD group
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本文编号：2852751