297例儿童病毒性脑炎的脑脊液病原分析和分子特征

发布时间：2020-10-30 18:16

　　 目的:病毒性脑炎是一种严重的神经系统疾病,发病率高,死亡率高,是危害儿童健康、致残甚至致死的重要原因之一。引起病毒性脑炎的病原复杂多样,约有100余种病毒,其中包括了疱疹病毒、肠道病毒、EB病毒、腺病毒、虫媒病毒等。而疱疹病毒和肠道病毒分别是散发性病毒性脑炎和流行性病毒性脑炎主要的病原体。对病毒性脑炎病原学的分析有助于其预防和治疗。本研究对2009年3月到2010年2月从云南某儿童医院收集297例确诊病毒性脑炎患者的脑脊液标本,进行病原学及其分子流行病学分析,为云南省的病毒性脑炎预防控制提供一定的实验数据。方法:1.采用实时荧光定量PCR方法对患儿脑脊液样品进行单纯疱疹病毒I/II型、水痘带状疱症病毒、EB病毒,巨细胞病毒,人疱疹病毒6型病毒和肠道病毒核酸检测。2.利用巢式RT-PCR对肠道病毒检测为阳性的样品进行扩增和测序,并经BLAST比对确定其肠道病毒的血清型。3.同时用SPSS软件回顾性的分析了患者的一般情况和临床特征。4.通过RD细胞进行病毒分离。5.使用MEGA 7、simplot3.5.1、RDP3等软件对CVB5全基因序列进行分析。结果:1、检测到的引起病毒性脑炎的主要病原分别为肠道病毒(EV)25例(25/35,71.4%),水痘带状疱症病毒(VZV)5例(5/35/,14.3%),单纯疱疹病毒(HSV)为 3 例(3/35,8.6%,1 型 2 例,2 型 1 例),EB 病毒为 2 例(2/35,2.9%),人疱疹病毒6型(HHV-6)为1例(2/35,2.9%),总的检测率为11.8%(35/297)。2、引起病毒性脑炎的肠道病毒血清型为柯萨奇病毒B组5型(CVB5,10/25,40.0%),埃可病毒30型(E30,4/25,16.0%),柯萨奇病毒B组1型(CVB1,3/25,12.0%),柯萨奇病毒A组9型(CVA9,2/25,8.0%)和埃可病毒9型(E9,2/25,8.0%)。3、在临床特征分析中最常见的症状是发热(92.9%)、头痛(81.8%)、颈强直(72.4%)和呕吐(65.7%),统计学显示,肠道病毒相关的脑炎和非肠道病毒相关的脑炎之间临床特征无对应关系,P值大于0.05,无统计学意义。4、获得一株阳性分离物(KMA2/YN/CHN/2010)经鉴定发现与CVB5同源性高达85%以上,根据肠道病毒血清型分型标准,属于CVB5。5、KMA2/YN/CHN/2010毒株全基因组全长为7395bp,其核苷酸及其氨基酸与A210/KM/09最为同源(98.8%和96.1%);而与其他CVB5毒株核苷酸和氨基酸同源性分别为79.6%～93.1%和93.1%～98.1%。系统进化分析显示KMA2/YN/CHN/2010与中国株亲缘关系较近,与其他国外CVB5分离株关系较远,属于不同的分支。经重组分析结果表明KMA2/YN/CHN/2010可能是一株重组株。结论:从2009年3月到2010年2月,引起病毒性脑炎的病原分别为HSV,VZV,EB病毒,CMV,HHV-6以及EV,其中最主要的是EV,而在EV中的血清型是CVB5,E30,CVB1,CVA9和E9,并与目前中国流行株的基因型一致;分离株KMA2/YN/CHN/2010可能发生了重组。为今后病毒性脑炎的预防及相关的研究提供了有效的参考依据和实验室资料。
【学位单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R725.1
【部分图文】：

Ｆｉｇｕｒｅ?１．?Ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＲＴ－ＰＣＲ??Ｍ：：?ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００，１、２、３、４、５、６、７分别代表检测的７个病毒性炎样品??表９．云南省２５例脑脊液标本肠道病毒血清型??Ｔａｂｌｅ?９．?Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ?ｓｅｒｏｔｙｐｅｓ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ?ｉｎ?２５?ＣＳＦ?ｓａｍｐｌｅｓ?ｉｎ?Ｙｕｎｎａｎ，?Ｃｈｉｎａ??血清型?检测数?占百分比（％）Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ?Ｂ５?１０?４０??Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓ?３０?４?１６??Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ?Ｂ１?３?１２??Ｃｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓ?Ａ９?２?８??Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓ?９?２?８??未检测出?４?１６

１．２．４．２?Ｅ３０完整ＶＰ１基因的系统进化分析??运用ＭＥＧＡ７软件，使用邻接法（ｎｅｉｇｈｂｏｒ－ｊｏｉｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄ）分别对本次检测到的??完整ＶＰ１序列的２株Ｅ３０?（８７６ｂｐ）构建了系统进化树如图３所示，在进化树中Ｅ３０分??２９??

?中国医学科学院北京协和医学院硕士研究生学位论文???为Ａ、Ｂ、Ｃ个进化支，Ｃ进化支又进一步分为Ｃ１和Ｃ２两个支，中国株都位于Ｃ进化??支上，其中来自于台湾、浙江的分离株位于Ｃ１上，本次的分离株与来自于山东，广??东，俄罗斯的分离株位于Ｃ２上，亲缘关系比较近；而与原型株和国外的分离株遗传??距离相比较远，亲缘关系也就比较远。??￣??
【参考文献】

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1 龚琼宇;赵智娴;丁峥嵘;;云南省2010～2013年疑似预防接种异常反应监测分析[J];中国疫苗和免疫;2015年05期

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本文编号：2862832