LPS对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作用

发布时间：2020-11-08 10:27

　　 新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypoxia-ischemia brain damage,HIND)是指围产期由于严重的窒息缺氧引起的脑缺氧缺血性损伤，是导致新生儿死亡和神经功能障碍的主要原因，目前尚无特效治疗措施。近年来感染在脑损伤中的单独或联合作用逐渐引起人们的重视，为探讨感染与缺氧缺血(HI)联合作用对脑损伤的影响，在建立LPS+缺氧缺血动物模型的基础上，以脑梗塞面积、脑组织含水量、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、凋亡诱导因子(AIF)作为观察指标，探讨LPS对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作用。 对象：(1) 不同剂量LPS的作用，分为0.3mg／g，0.6mg／kg，0.9mg／kg和生理盐水对照组，各6只；(2)LPS与不同缺氧缺血时间(10min，20min，30min，40min，50min)对脑损伤的联合作用，分为LPS注射组(0.3mg／kg)和生理盐水对照组，各30只。(3)LPS+HI20min与H155min对脑梗塞面积、脑组织含水量、TNF-a、AIF阳性细胞的影响：分为对照组，HI55 min组，LPS+HI20 min组， 一 各34只。 施：＊）新生大鼠IlBD模型制作：新生大鼠乙醚吸入麻醉，切 开颈部皮肤，分离并结扎左侧颈总动脉，休息lh后吸入8％氧气形2％ 氮气混合气55仍屯对照组只切开颈部皮肤，分离左侧颈总动脉， 不结扎亦不缺氧。o）新生大鼠LPS＋W脑损伤模型制作：①不同剂量 LPS的作用：给予 0．3mg／kg，0．6mg／kg，0．gmg／kg和生理盐水）IH，＂－uxAI－－－－射 后，观察肛温和体重的变化，72h作MAP《免疫组化染色。r PS与不 同缺氧缺血时间对脑损伤的鹏作用：LPS组①．3ffig八g店生理盐水 组均于注射4 小时后结扎左侧颈总动脉并吸入8％的氧 10mln，20min，30min，40min，50min，72h作 MAP－2免疫组化染色。③ LPS＋HI脑损伤模型制作：新生大鼠缺氧缺血前4小时给腹鹏射LPS 0．3m咐，后经乙醚吸入麻醉，切开颈部皮肤，分离并结扎左侧颈总 动脉并吸入鳅氧气92％歇鹏气20脓八3）各指标的测定：删 髓面积测定：动物分别于缺氧后3h、sh、2汕、72h经心脏灌注后 取脑，4y的多聚甲醛固定24小时，再经脱水、包埋制成蜡块，连续 冠状切片，进行微管相关蛋白七（MAP上）免疫组化染色，染色结果 经图象分析系统处理，计算出脑损伤的髓；鄙卤组织含水量测定： 各组动物均于缺血濒后44小时处死，快速取脑，除去嗅脑，小脑 和脑干，沿大脑中央纵裂分离左右大脑半球，用电子大平精确称量， 然后置烤箱中烘干再称重，用公式［（湿重－干重）十湿重」XI 00％来 表示脑组织含水量；＠ITN’－川免疫组化染色：冠状切片进行MA 免疫组化染色，染色结果在400 Wb下进行阳性细胞计数，每张片于 2 郑州大学2002年研究生毕业论文 ＊PS对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作m 计数大脑皮层损伤区域3个视野；＠）All：免疫组化染色：冠状切片进 行AIF免疫组化染色，染色结果在400 N下进行细胞形态学观察。 ④统计学处理采用单因素方差分析、上检验，统计数据用SPSS软件处 理。 e：（1）LPS＋HI o伤模型：hPS 0．3。g／kg il与对照组均无 动物死亡，贿、体重的增加与对照组相比无统计学意义（P＞0“人 ＠LPS组动物的死亡率随 HI延长而增加门 0儿 50min 35们， LPS组mZO min脑损伤程度明显大于对照组（P＜0．05），3Omin日， 仍明显大于对照组o＜0“人 40min时与对照组相比无明显差别 （P＞0．05），50min两组脑损伤鹏相同。（2）各指标狈定：厕卤梗塞面 积：W 55邢＋aLPS＋HI20邪？组的脑梗塞面积明显增加，与对照 组相比均有显著性差异①＜0“）；LPS＋M20分钟组脑梗塞面积与 M 55分钟相b无明显差异（P＞0刀5）。②脑组织含水量：HI 55分钟组 及LPS＋allo分钟组的脑组织含水量明显增加，与对照组相比均有显 著性差异p＜0＊5）LP S＋WZO分钟组与HI 55邢？十L无明显差 异（P＞0．05）。③TNF－口卜性细胞计数：HI 55分钟组及 LPS＋M＋M20分 钟组阳性细胞数明显增加，与对照组相比均有显著性差异①刃刀5）； ＊＊S＋HIZO分钟组卜性细胞数与W 55卅＋相b无明显差异①＞0刀5）。 w免疫组化：AIF存在于正常细胞的线粒体中，在M和注射LPS ］8迅速从线粒体中转移到细胞核内，且出现在大脑损伤区域（MAP上 阴性区域人 结论：（1兀PS 0．3m帅和单纯M 201：1fill均不宫5！起明显的脑损伤， 3 郑州大学2002年研究生毕业论文 卜陀对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的增敏作用 二者联合作用却可以引起明显的脑损伤，且LPS＋M 20Inin与W 55恤引起的脑损伤基本相同，提示LPS对 m引起的脑损伤有增敏作用。 Q）LPS对HI脑损伤增敏作用可能是通过TN’F川介导的炎 症反应、AIF介导的细胞凋亡引起的。
【学位单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2002
【中图分类】：R722.1
【部分图文】：

州大学2002年研究生毕业论文LPS对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的.LEFTCONHI55minLPS+HI20min图3LPS对HIBD大鼠脑组织含水量的影响
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