前B细胞集落促进因子诱导正常人及重型先天性中性粒细胞减少症患者髓系细胞分化功能研究

发布时间：2020-11-13 00:04

　　 目的： 研究前B细胞集落促进因子(Pre-B-cell colony-enhancing factor，PBEF)诱导正常人以及重型先天性中性粒细胞减少症患者(severe congenital neutropenia，SCN)的CD34~+细胞向髓系细胞分化功能。 方法： 1、利用激光辅助骨髓涂片单个细胞采集技术及逆转录实时定量PCR方法检测正常人骨髓中不同分化阶段髓系细胞PBEF表达水平。 2、用逆转录实时定量PCR及ELISA方法检测正常人的髓系细胞经粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor，G-CSF)体内、外刺激后PBEF mRNA表达水平、细胞培养液或血浆中PBEF蛋白质水平，同时检测细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD~+)合成水平的变化，研究G-CSF刺激与PBEF表达、NAD~+合成的关系。 3、用人类重组PBEF体外刺激正常人的CD34~+细胞后，通过光学显微镜观察细胞形态学的变化、流式细胞术检测表面抗原CD11b、CD15的表达以及逆转录实时定量PCR检测细胞C/EBPa、C/EBPe、PU．1和ELA2等基因mRNA的表达，研究PBEF胞外刺激与CD34~+细胞向髓系分化的关系。 4、正常人的CD34~+细胞经由Lentivirus转导PBEF基因后，光学显微镜观察细胞形态学的变化、流式细胞术检测表面抗原CD11b、CD15的表达变化以及逆转录实时定量PCR检测细胞C/EBPa、C/EBPe、PU．1和ELA2等基因mRNA的表达变化，研究PBEF胞内过度表达与CD34~+细胞向髓系分化的关系。 5、用逆转录实时定量PCR、ELISA方法以及共聚焦荧光显微镜断层扫描技术检测经长期G-CSF治疗的SCN病人髓系细胞的PBEF mRNA、胞内蛋白质水平以及血浆蛋白质水平的变化，研究G-CSF治疗后SCN病人髓系细胞“成熟障碍”的纠正与PBEF表达变化的关系
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R725.5
【部分图文】：

3.SCN的临床特征SCN病人自生后就频繁出现严重的细菌感染，首发症状多为口腔炎，但中耳炎、上呼吸道感染、肺炎、皮肤脓肿、肝脓肿也不少见。血培养常见格兰氏阳性葡萄球菌或链球菌生长，假单胞菌和消化链球菌属的细菌偶见，有时也可检出真菌。SCN的ANC小于或等于.02xlo沉，有时伴有轻度的贫血和血小板增多以及单核细胞和嗜酸性细胞的增高。大多数病人的gIG水平稍增高，接种疫苗后产生的特殊免疫能力正常，血液生化检查如电解质、肝肾功能正常‘8’。所有SCN的骨髓形态学检查都共有一个别于其他粒细胞减少症的特征性表现，即粒细胞的前体细胞在早幼粒一中幼粒阶段“成熟障碍”。骨髓中的早幼粒细胞轻度升高，嗜酸性细胞常增多，巨核细胞形态及数目正常如图1、2所示。
【引证文献】

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1 李洁;前B细胞克隆增强因子（PBEF）在急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织中的表达与功能及清胰汤干预的实验研究[D];大连医科大学;2010年

本文编号：2881430