JNK和ERK5在BMP9诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化中的作用

发布时间：2020-12-14 07:35

　　第一部分经BMP9诱导后C3H10T1/2细胞JNK和ERK5的激活情况目的：检测经高滴度携带GFP和BMP9基因的重组腺病毒转染C3H10T1/2细胞后JNK和ERK5的激活情况。方法：培养HEK293细胞，并用其对AdBMP9和AdGFP进行扩增，提高AdBMP9和AdGFP的滴度。高滴度AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞24h后，荧光显微镜观察GFP的表达情况并用流式细胞仪检测转染效率，免疫荧光技术定位p-JNK和p-ERK5在细胞内的表达部位，利用CCK-8检测特异性抑制剂对细胞生长情况的影响，Western blot检测加入JNK或ERK5信号通路特异性抑制剂SP600125或BIX02189并转染后JNK和ERK5的激活情况。结果：1.流式细胞仪检测高滴度AdBMP9和AdGFP转染C3H10T1/2细胞24h后的转染效率均可达50%左右。2.倒置显微镜下观察AdBMP9转染后细胞的形态随培养时间的延长由多边形逐渐向长梭形转变，且细胞间链接更加紧密。3.免疫荧光技术结果显示各组细胞的胞质、胞核均可见p-JNK及p-ERK5的表达，但经AdBMP9诱导后p-J... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同浓度药物作用下C3H10T1/2细胞的生存率曲线

A:HEK293 cells cultured 24h; B:HEK293 cells cultured 48h; C:C3H10T1/2 cells cultured 24h; D:C3H10T1/2 cells cultured 48h图 1.1 倒置显微镜下的 HEK293 细胞及 C3H10T1/2 细胞(×100)Fig 1.1 HEK293 cells and C3H10T1/2 cells under inverted microscope(×100)A1:AdGFP transfection after 24h under Inverted microscope; A2:AdGFP transfection after 24h under Fluorescence microscopeB1:AdBMP9 transfection after 24h under Inverted microscope; B2:AdBMP9 transfection after 24h under Fluorescence microscopeC1: AdGFP transfection after 72h under Inverted microscope; C2: AdGFP transfection after 72h under Fluorescence microscopeD1:AdBMP9 transfection after 72h under Inverted microscope; D2 :AdBMP9 transfection after 72h under Fluorescence microscope图 1.2 倒置显微镜及荧光显微镜下的 HEK293 细胞(×100)

流式细胞术检测转染效率


本文编号：2916076