人少突胶质前体细胞体外分化及体内成髓鞘研究

发布时间：2020-12-17 21:27

　　背景:脑白质损伤（white matter injury,WMI）是早产儿最常见的脑损伤形式,目前尚无有效疗法,导致脑瘫等后遗症。少突胶质前体细胞（oligodendrocyte precursor cells,OPCs）是中枢神经系统（central nervous system,CNS）唯一的天然成髓鞘前体细胞,WMI时OPCs特异性受损,使得少突胶质细胞（oligodendrocytes,OLs）分化成髓鞘障碍,最终导致白质区广泛脱髓鞘,从而引发神经功能障碍。细胞移植是治疗WMI的新希望,而OPCs是理想的种子细胞。本实验室已成功通过人胎脑神经干细胞（neural stem cells,NSCs）快速、稳定诱导出OPCs,但OPCs的分化及成髓鞘功能尚有待验证。目的:探讨本实验室诱导的人OPCs的功能性,包括体外分化成熟为OLs能力和体内移植成髓鞘能力。方法:对人NSCs诱导获得的OPCs,通过PDGFR-α、A2B5、NG2、SOX10等OPCs特异性标记及星形胶质细胞（astrocytes,AST）的标记GFAP、神经元的标记Tuj-1行免疫荧光染色（immunofluore... 

【文章来源】：南方医科大学广东省

【文章页数】：75 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－２不同厚度神经球冰冻切片的Ｎｅｓｔｉｎ免疫荧光染色（Ｘ?１００）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｎｅｓｔｉｎ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ?ｆｒｏｚｅｎ??ｓｅｃｔｉｏｎｓ?（Ｘ?１００）??

??ＮＳＣｓ接种于无包被Ｔ２５培养瓶中诱导的ＯＰＣｓ如图２－１－Ｂ所示：培养２天，??可见细胞悬浮生长，不贴壁，细胞聚集或增殖为小细胞团；培养４天观察，小细??胞团生长为周边较圆润的细胞球，折光性良好；培养６天观察，细胞球开始崩散、??坏死，无法继续培养。??Ｈ??图２－１原代诱导的ＯＰＣｓ?（Ｘ?１００）?Ａ：贴壁诱导的原代ＯＰＣｓ，培养１２天：Ｂ：悬浮诱导??的ＯＰＣｓ，培养６天??Ｆｉｇｕｒｅ２－１?Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｏｌｉｇｏｄｃｎｄｒｏｃｙｔｅｓ（ｘ?１００）?Ａ：?Ｐｒｉｍａｒｙ?ＯＰＣｓ?Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?Ａｄｈｅｒｅｎｃｅ?ｆｏｒ??１２?Ｄａｙｓ；?Ｂ：?Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＯＰＣｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?６?ｄａｙｓ??２．３．２倒置显微镜下观察传代ＯＰＣｓ生长情况??接种于ＰＤＬ／ＬＮ包被培养板上的传代ＯＰＣｓ贴壁３天观察，细胞均己贴壁，??形态良好，较为一致。有圆形或椭圆形的胞体，折光性强，从胞体边缘爬出双极??突起

?培养６天?培养９天??图２－２在ＴＯＬ／Ｌｎ包被孔板中培养的传代ＯＰＣｓ?（?Ｘ?１００）??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＯＰＣｓ?ｉｎ?ＰＤＬ／Ｌｎ?ｃｏａｔｅｄ?ｐｌａｔｅｓ（?Ｘ?１００）??将传代的ＯＰＣｓ接种于无包被的六孔板中培养，前几天观察到细胞悬浮生长，??聚成小团，慢慢成球生长，周边有毛刺，折光性可，形态与神经球相似。长时间??培养发现悬浮的球沉底，向四周放射状爬出细胞。细胞形态与ＯＰＣｓ类似，具有??较圆且折光性良好的胞体，短而直的二三极突起。摇晃培养瓶，中央的球可以飘??起，部分爬出的细胞继续贴壁（如图２－３）。??土４?参?１９?天??图２－３在无包被培养瓶中培养的传代ＯＰＣｓ?（Ｘ２００）??Ｆｉｇｕｒｅ２－３?Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＯＰＣｓ?ｉｎ?ｕｎｃｏａｔｅｄ?ｆｌａｓｋｓ?（Ｘ?２００）??２．３．２免疫荧光染色鉴定传代的ＯＰＣｓ??接种于ＰＤＬ／ＬＮ包被培养板上的ＯＰＣｓ，培养４天后免疫荧光染色鉴定其是??否为ＯＰＣｓ，结果表明Ａ２Ｂ５阳性率为８８．２１?±２．４０％，?ＳＯＸ１０阳性率为９０．４１?土??１．７２％

【参考文献】：
期刊论文
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[3]早产儿脑白质损伤诊断、防治与综合管理的专家组意见[J]. 侯新琳,冯琪,汤泽中,吴晔,周丛乐,童笑梅,封志纯,尹晓娟,陈超,程国强,王来栓,周文浩,虞人杰,周晓玉,母得志,刘俐,毛健,岳少杰,俞惠民.  中国新生儿科杂志. 2015(03)
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本文编号：2922744