合肥地区新生儿人巨细胞病毒先天性感染的基因型分析

发布时间：2021-04-05 22:31

　　目的本研究采集正常产妇抗凝脐带血样本进行人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）分离和鉴定,分析探讨合肥地区HCMV先天性感染的分子流行病学特征和病毒糖蛋白B基因型别。为进一步研究其致病性、免疫性以及研制HCMV亚单位疫苗提供依据。方法从临床采集正常顺产妇（年龄在19～38岁）的脐带血样本160例,按实验设计分别作如下处理:（1）HCMV先天性感染的实验室检测:HCMV病毒分离,将样本接种至人胚成纤维细胞（HF）上,观察CPE（Cytopathic effect,CPE）,对分离得到的病毒株应用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay ,IFA）鉴定后,体外培养病毒并提取DNA采用PCR检测HCMV IE和UL83基因。同时应用pp65抗原血症的方法直接检测脐带血白细胞样本中HCMV pp65抗原。记录分析结果,确定合肥地区新生儿HCMV先天性感染率。（2）HCMV先天性感染临床分离株的基因型分析:通过限制性片段长度多态性分析（RFLP）对Rsa I和Hinf I酶切位点的突变情况进行分析;对PCR产物进行纯化后测序... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HCMV的糖蛋白B

从安徽省合肥市妇幼保健院共采集 160 例脐带血样本，将样本接种至 HF 细胞进行病毒分离。经盲传三代观察到具有典型 HCMV CPE 的共 40 份，病毒分离率为 25.0%。倒置显微镜下见 CPE 为：开始为灶性病变，病变细胞明显肿胀变圆，核变大，形成巨大细胞, 细胞折光性增强（详见图 2)。取出现 CPE 的细胞涂片，固定以后做 IFA 检测 HCMV pp65 抗原，HCMV 阳性标本在 HF 细胞核内可检测到苹果绿色阳性信号，阴性标本则无苹果绿色信号，仅见红色信号（详见图 3)；PCR 检测上述细胞培养物的 HCMV IE、UL83 基因，结果显示：HCMV IE PCR阳性标本均在 242bp 处检测到特异性条带（详见图 4A)；HCMV UL83 PCR 阳性标本均在 766 bp 处检测到特异性条带（详见图 4B),再次证实上述细胞培养物感染了HCMV。

图 3 病毒分离培养细胞玻片 IFA 结果（免疫荧光染色，×100）Fig3 Results of indirect immunofluorescence（Immunofluorescent staining，×100）A：HF 细胞培养物玻片 B：HCMV 阳性样本细胞培养物玻片A： Normal HF cells B：The cultures in HCMV positive sampleA B

【参考文献】：
期刊论文
[1]不同糖蛋白B基因型人巨细胞病毒感染与慢性牙周炎的关系[J]. 陈莉丽,孙伟莲,严杰,余钟声.  中华口腔医学杂志. 2006(04)



本文编号：3120225