抑制PTEN核转移在新生鼠HIBD修复中的作用及相关机制探讨
发布时间：2021-04-16 00:03
第一部分缺氧缺血诱导PTEN核转移的分子机制及抑制PTEN核转移在HIBD大鼠中的神经保护作用目的:新生儿缺氧缺血性脑病（Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE）是导致新生儿或者围产儿死亡和神经元损伤的主要原因。然而目前针对HIE尚没有令人满意的治疗方法。课题组前期研究发现在兴奋性/缺血性神经元损伤的体外和体内模型中人类第10号染色体同源缺失性磷酸酶张力蛋白（Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）核转移增加,而抑制PTEN核转移降低了兴奋性/缺血引起的神经元死亡。因此本研究旨在探究在发育期的大脑中缺氧缺血诱导PTEN核转移的潜在机制以及抑制PTEN核转移对缺氧缺血引起的神经元损伤的影响,并阐明抑制PTEN核转移对HIE的动物模型缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）大鼠行为缺陷的保护作用。方法:（1）孕18-20天的SD（Sprague Dawley,SD）胎鼠用于体外培养原代海马和皮层神经元,培养的第3天用慢病毒处理,...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代神经元中OGD后总蛋白和核蛋白中PTEN蛋白水平
图 2 原代培养的神经元中 OGD 后不同时间点 PTEN 核转移情况。Fig. 2 Immunofluorescence figure of PTEN nuclear translocation induced by OGD atdifferent time in primary neurons.2.3 OGD 后 PTEN 的单泛素化情况图 1 和 2 实验结果表明 OGD 后 PTEN 核转移增加，且最近在癌细胞中的研究发现核内 PTEN 累积的增加与 PTEN 单泛素化有关[38]，特别是 PTEN 的 13 位和289 位赖氨酸位点的单泛素化[33, 39]，首先我们在 HEK293T cell 和原代神经元中检测 OGD 后 PTEN 的单泛素化情况。研究结果显示：不管是在 HEK293T cell 还是在原代神经元中，与对照组相比，OGD 后 PTEN 出现单泛素化（图 3A，B）。该结果表明 OGD 诱导的 PTEN 核转移与 OGD 诱导的 PTEN 单泛素化有关。
接下来我们想要确定已经报道过的与 PTEN 单泛素化入核有关的 PTEN 的 1位和 289 位位点的突变对 OGD 诱导的 PTEN 入核的影响。Westernblot 结果显示：PTEN 的 13 位位点突变能明显的抑制 OGD 诱导的 PTEN 核转移（HEK293T celn=5，EGFP-PTENK13R+OGD 组，p＜0.01vs.EGFP-PTENWT+OGD 组。原代神经元：n = 5，LVEGFP-PTENK13R+ OGD 组，p＜0.01 vs. LVEGFP-PTENWT+ OGD 组）（图 4AB），但是PTEN的289位位点突变对OGD诱导的PTEN核转移没有影响（HEK293cell：n= 5，EGFP-PTENK289R+OGD 组，p＞0.05 vs. EGFP-PTENWT+ OGD 组。原代神经元：n = 5，LVEGFP-PTENK13R+ OGD 组，p＞0.05 vs. LVEGFP-PTENWT+ OGD 组）（图 4A，B）。说明 PTEN 的 13 位位点在 OGD 诱导的 PTEN 核转移中发挥重要作用。
本文编号：3140343
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：119 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
原代神经元中OGD后总蛋白和核蛋白中PTEN蛋白水平
图 2 原代培养的神经元中 OGD 后不同时间点 PTEN 核转移情况。Fig. 2 Immunofluorescence figure of PTEN nuclear translocation induced by OGD atdifferent time in primary neurons.2.3 OGD 后 PTEN 的单泛素化情况图 1 和 2 实验结果表明 OGD 后 PTEN 核转移增加，且最近在癌细胞中的研究发现核内 PTEN 累积的增加与 PTEN 单泛素化有关[38]，特别是 PTEN 的 13 位和289 位赖氨酸位点的单泛素化[33, 39]，首先我们在 HEK293T cell 和原代神经元中检测 OGD 后 PTEN 的单泛素化情况。研究结果显示：不管是在 HEK293T cell 还是在原代神经元中，与对照组相比，OGD 后 PTEN 出现单泛素化（图 3A，B）。该结果表明 OGD 诱导的 PTEN 核转移与 OGD 诱导的 PTEN 单泛素化有关。
接下来我们想要确定已经报道过的与 PTEN 单泛素化入核有关的 PTEN 的 1位和 289 位位点的突变对 OGD 诱导的 PTEN 入核的影响。Westernblot 结果显示：PTEN 的 13 位位点突变能明显的抑制 OGD 诱导的 PTEN 核转移（HEK293T celn=5，EGFP-PTENK13R+OGD 组，p＜0.01vs.EGFP-PTENWT+OGD 组。原代神经元：n = 5，LVEGFP-PTENK13R+ OGD 组，p＜0.01 vs. LVEGFP-PTENWT+ OGD 组）（图 4AB），但是PTEN的289位位点突变对OGD诱导的PTEN核转移没有影响（HEK293cell：n= 5，EGFP-PTENK289R+OGD 组，p＞0.05 vs. EGFP-PTENWT+ OGD 组。原代神经元：n = 5，LVEGFP-PTENK13R+ OGD 组，p＞0.05 vs. LVEGFP-PTENWT+ OGD 组）（图 4A，B）。说明 PTEN 的 13 位位点在 OGD 诱导的 PTEN 核转移中发挥重要作用。
本文编号：3140343
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