同型半胱氨酸致大鼠仔鼠先天性心脏病与SRF基因表达的相关性研究
发布时间：2021-08-18 12:12
目的通过建立同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）诱导的仔鼠先天性心脏病（Congenital heart defect,CHD）模型,观察仔鼠心脏畸形情况,探讨不同剂量的Hcy对CHD仔鼠心肌病理损害程度与血清反应因子（Serum response factor,SRF）表达水平的关系,进一步探讨Hcy导致CHD的分子机制。方法40只S-D孕鼠随机分为四组:低剂量Hcy建模组（A组）、高剂量Hcy建模组（B组）,高剂量Hcy+FA+VitB12干预组（C组）,对照组（D组）,每组各10只。大鼠妊娠第7～17天腹腔注射不同剂量的Hcy:A组1%Hcy 0.1ml/10g.Wt/d、B组2%Hcy 0.1ml/10g.Wt/d、C组2%Hcy 0.1ml/10g.Wt/d、D组用生理盐水0.1ml/10g.Wt/d注射,C组自确定妊娠起至分娩,按FA 0.05mg/10g.Wt/d+VitB12 1mg/10g.Wt/d饮水喂养。分娩当天解剖仔鼠,体视显微镜观察仔鼠心脏畸形情况。A、B、C三组选取CHD仔鼠心脏各2例,D组选取非CHD...
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
部分心肌组织标本RNAI%琼脂糖凝胶电泳图
取PcR扩增产物1川，2%琼脂糖凝胶电泳检测逆转录的结果，应用凝胶成像系统检测分析有无目的基因S邵基因及管家基因GAPDH的扩增，从而判断cDNA合成的质量并判断目的片段的大小。见图2一2，与DNAM田上er比照，各片段的PCR反应产物的长度与所设计的各片段大小预期值符合，特异性较理想，可进行实时荧光定量PCR。电泳条件:电压80V;时间20min。图2一SRF基因及G人卫DH扩增产物2%琼脂糖凝胶电泳图1、2为SRF，3、4为GA卫DH，片段大小分别为152帅，140饰2.3.4.5实时荧光定量PCR检测cDNA使用 SYBRGreenl荧光染料进行定量PCR反应，反应体系混匀后放入PCR热循环仪中进行。优化循环条件及退火温度后进行实时荧光定量检测。反应体系
增以从72℃开始缓慢升温，系统定时检测各管的荧光强度，并以温度为横坐标，以该温度相对荧光强度的变化为纵坐标，自动绘制熔解曲线，熔解曲线的波峰所在的温度为熔点温度(Tm)，在88℃左右，说明引物特异性较好(见图2一)。图2一4实时荧光定量PCR熔解曲线图③相对定量公式及表达量按照Livak和Schttgen设计的比较闽值法来测定目的基因的相对表达的方法，该方法根据数学推导公式得出目的基因的量:目的基因量=2一△△Ct
【参考文献】：
期刊论文
[1]湖南省出生缺陷发生的动态分析[J]. 杜其云,林爱云,唐赵丹. 中国妇幼保健. 2007(31)
[2]围孕期补充多种维生素可减少子代某些先天畸形的发生[J]. 朱毓纯,杨慧霞,高雪莲. 中华围产医学杂志. 2006(05)
[3]同型半胱氨酸、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体和叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响[J]. 赵丽君,董静霞,毕振伍,吕丹瑜,李英. 解剖学报. 2005(04)
[4]细胞凋亡的检测方法(综述)[J]. 矫毓娟,刘江红. 中国神经免疫学和神经病学杂志. 2004(01)
[5]同型半胱氨酸体内外诱导鼠胚胎心肌细胞凋亡的研究[J]. 刘虹,李勇,叶鸿瑁,李松,管增伟,胡白和,赵智榕. 中国生育健康杂志. 2002(04)
[6]血浆同型半胱氨酸、叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天性心脏病的相关性研究[J]. 刘虹,李松,叶鸿瑁,韩玲,孟昭亨,朱慧萍,郝玲,李勇. 中华围产医学杂志. 2002(02)
[7]HCY-2基因和同型半胱氨酸与鸡胚先天性心脏畸形发生的关系[J]. 李勇,李松,陈光慧,胡白和,孟昭亨,陈星,赵如冰,张晨晖,刘虹,赵智榕,汤健,李竹. 中华医学杂志. 2000(02)
[8]同型半胱氨酸对鸡胚早期心血管发育的影响[J]. 李勇,李竹,陈星,齐佩文,李松. 中华预防医学杂志. 1999(03)
本文编号：3349863
【文章来源】：中南大学湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
部分心肌组织标本RNAI%琼脂糖凝胶电泳图
取PcR扩增产物1川，2%琼脂糖凝胶电泳检测逆转录的结果，应用凝胶成像系统检测分析有无目的基因S邵基因及管家基因GAPDH的扩增，从而判断cDNA合成的质量并判断目的片段的大小。见图2一2，与DNAM田上er比照，各片段的PCR反应产物的长度与所设计的各片段大小预期值符合，特异性较理想，可进行实时荧光定量PCR。电泳条件:电压80V;时间20min。图2一SRF基因及G人卫DH扩增产物2%琼脂糖凝胶电泳图1、2为SRF，3、4为GA卫DH，片段大小分别为152帅，140饰2.3.4.5实时荧光定量PCR检测cDNA使用 SYBRGreenl荧光染料进行定量PCR反应，反应体系混匀后放入PCR热循环仪中进行。优化循环条件及退火温度后进行实时荧光定量检测。反应体系
增以从72℃开始缓慢升温，系统定时检测各管的荧光强度，并以温度为横坐标，以该温度相对荧光强度的变化为纵坐标，自动绘制熔解曲线，熔解曲线的波峰所在的温度为熔点温度(Tm)，在88℃左右，说明引物特异性较好(见图2一)。图2一4实时荧光定量PCR熔解曲线图③相对定量公式及表达量按照Livak和Schttgen设计的比较闽值法来测定目的基因的相对表达的方法，该方法根据数学推导公式得出目的基因的量:目的基因量=2一△△Ct
【参考文献】：
期刊论文
[1]湖南省出生缺陷发生的动态分析[J]. 杜其云,林爱云,唐赵丹. 中国妇幼保健. 2007(31)
[2]围孕期补充多种维生素可减少子代某些先天畸形的发生[J]. 朱毓纯,杨慧霞,高雪莲. 中华围产医学杂志. 2006(05)
[3]同型半胱氨酸、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体和叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响[J]. 赵丽君,董静霞,毕振伍,吕丹瑜,李英. 解剖学报. 2005(04)
[4]细胞凋亡的检测方法(综述)[J]. 矫毓娟,刘江红. 中国神经免疫学和神经病学杂志. 2004(01)
[5]同型半胱氨酸体内外诱导鼠胚胎心肌细胞凋亡的研究[J]. 刘虹,李勇,叶鸿瑁,李松,管增伟,胡白和,赵智榕. 中国生育健康杂志. 2002(04)
[6]血浆同型半胱氨酸、叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与先天性心脏病的相关性研究[J]. 刘虹,李松,叶鸿瑁,韩玲,孟昭亨,朱慧萍,郝玲,李勇. 中华围产医学杂志. 2002(02)
[7]HCY-2基因和同型半胱氨酸与鸡胚先天性心脏畸形发生的关系[J]. 李勇,李松,陈光慧,胡白和,孟昭亨,陈星,赵如冰,张晨晖,刘虹,赵智榕,汤健,李竹. 中华医学杂志. 2000(02)
[8]同型半胱氨酸对鸡胚早期心血管发育的影响[J]. 李勇,李竹,陈星,齐佩文,李松. 中华预防医学杂志. 1999(03)
本文编号：3349863
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