探索MicroRNA-206治疗BPD小鼠效果

发布时间：2017-05-17 05:03

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【摘要】：目的:探讨mi R-206对高氧导致昆明白色小鼠BPD的干预效果。方法:小鼠持续暴露于高浓度氧环境建立BPD小鼠模型,预定4窝刚出生昆白小鼠,分为高氧对照组(O2)、高氧mi R-206处理组(206)、高氧空白质粒对照组(NC)和空气对照组(Air),随机分配,每组约8只,高氧环境的3组小鼠共养于同一养殖箱内,氧气浓度维持在80%左右。生后每周称体重并观察记录小鼠一般状态;生后第20日龄开始高氧mi R-206处理组、高氧空白质粒对照组开始干预治疗和干预对照处理共2周疗程,最后一次治疗3天后于小鼠苯巴比妥钠麻醉,进行眼眶采血,离心取血清保存于-80℃。开胸取肺,对称部位取肺组织分别保存标本于4%多聚甲醛溶液、液氮、-20℃冰箱。试验中主要应用的试验方法有肺组织石蜡切片HE染色、马森三色染色、辐射状肺泡计数(radial alveolar counts,RAC)及ELISA、Real-time PCR和肺组织冰冻切片免疫荧光等技术。结果:1.重组mmu-mi R-206质粒经尾静脉高压注射入小鼠体内后,RT-PCR检测肺组织mi R-206的m RNA表达,与NC组和O2组相比206组mi R-206 m RNA表达增加,P0.01,差异有统计学意义。证明本实验该外源基因成功导入。2.206组较NC组和O2组小鼠体重无统计学差别,但206组小鼠离氧后活动耐力较NC组和O2组好;mi R-206组与Air组相比肺湿重高、干湿重比低,但与NC组和O2组相比肺湿重明显下降、干湿重比较高,P0.05,差异有统计学意义;肺组织病理切片观察发现:NC组和O2组肺泡大小不等,肺泡间隔炎细胞浸润、增宽,甚至呈块状,脏膜下炎性反应明显,甚至有纤维化倾向;Air组织结构正常、肺泡大小均一,无炎细胞浸润;206组较NC组和O2组炎性反应低,脏膜下无明显炎性反应,但马森三色染色显示肺间质胶原蛋白沉积物无明显差异。3.206组小鼠血清IL-6、TGF-β浓度较NC组低,P0.05,差异有统计学意义。PCR试验显示FN1基因的m RNA表达下降,而免疫荧光显示FN1的蛋白表达量无明显下降。结论:本研究小鼠尾静脉注射重组质粒mmu-mir-206,使小鼠肺组织mi R-206表达上调,通过下调前炎性因子IL-6水平抑制炎症反应扩大,并进一步使FN1基因的m RNA表达下降,分子水平上显示肺纤维化有改善趋势。因干预治疗起始时间迟和持续治疗时间短,病理组织结构上尚无得到明显改善,可能说明mi R-206抗纤维化作用具有时间依赖性;同时mi R-206的上调伴随血清TGF-β水平下降。
【关键词】：小鼠 尾静脉注射 miR-206 IL-6 TGF-β BPD
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R722
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 常用缩写词中英文对照表10-11
• 前言11-12
• 1 材料与方法12-21
• 1.1 常规分子生物学试剂12
• 1.2 实验设备及特殊试剂12-14
• 1.3 动物实验14-15
• 1.4 实验方法15-21
• 2 结果21-29
• 2.1 小鼠一般情况21-22
• 2.2 各组小鼠每周体重比较22
• 2.3 肺组织结构形态22-24
• 2.4 肺组织冰冻切片免疫荧光染色24
• 2.5 肺组织miR-206 及FN1 基因miRNA206、mRNA表达量24-28
• 2.6 ELISA检测血清中IL-6、TGF-β结果28-29
• 3 讨论29-34
• 4 结论34-35
• 参考文献35-40
• 综述40-50
• 参考文献44-50
• 致谢50-51
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果51-52
• 个人简历52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 孔令凯;章晟;封志纯;;支气管肺发育不良的研究进展[J];实用儿科临床杂志;2012年14期

2 赵静;刘瑞娟;;特发性肺间质纤维化的相关研究进展[J];山东医药;2014年07期

3 马丽萍,郑兴,张国元,秦永文,吴宗贵;17β-雌二醇对白细胞介素6诱导的内皮细胞损伤的影响[J];中国老年学杂志;2001年02期

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本文编号：372566