地塞米松干预宫内感染致新生鼠脑白质损伤TNF-a及Nogo-A的表达变化

发布时间：2017-06-26 15:21

  本文关键词：地塞米松干预宫内感染致新生鼠脑白质损伤TNF-a及Nogo-A的表达变化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过研究推测宫内感染致新生鼠脑白质损伤与肿瘤坏死因子-а(TumorNecrosis Factor-а,TNF-а)及神经轴突生长抑制因子-A(Neurite outgrowth inhibitor A,Nogo-A)有关；地塞米松（Dexamethasone,Dex）可能通过减少脑组织TNF-а、Nogo-A表达，对宫内感染致新生鼠脑白质损伤有保护作用。 方法：1.建立动物模型及实验分组：将36只Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠，12只SD雄性大鼠适应环境1周后，以3:1比例合笼，每日清晨观察母鼠阴道，以发现阴道阴栓之日记为受孕第1日，未发现阴栓的雌性大鼠做阴道拭子的图片，镜下的发现精子即记为受孕。选取30只确定受孕的SD雌鼠随机分为，生理盐水（Normal saline,NS）组， LPS组，Dex组，每组10只。NS组在SD母鼠孕第15、16天腹腔内注射生理盐水0.35mg/kg.d，连续2天，LPS组在SD母鼠孕第15、16天腹腔内注射LPS，0.35mg/kg.d，连续2天。Dex组在SD母鼠孕第15、16天腹腔注射LPS，0.35mg/kg.d，注射LPS后1小时，相同方法注射Dex，0.5mg/kg.d，连续2天。 2.采集标本：除去孕22天前，娩出的早产鼠，足月新生鼠娩出后，分别于生后4个时间点(6h，12h，24h，48h)断头处死，每个时间点8只，断头处死后迅速取脑组织于10％福尔马林溶液中固定12h，然后进行常规脱水、石蜡包埋，应用苏木素-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察各组各时间点新生鼠脑组织病理形态及组织结构的变化。在新生鼠娩出后，夹起脱落的胎盘，蒸馏水冲洗后固定于10％福尔马林溶液，，12h后进行常规脱水、石蜡包埋。随机选取NS组，LPS组及Dex组的母鼠，每组2只，断头处死后取其子宫，10％福尔马林溶液中固定12小时后，然后进行常规脱水、石蜡包埋，HE染色观察各组母鼠子宫、胎盘病理形态及组织结构的变化，及镜下中性粒细胞的数量。 3.观察指标：采用S-P（Streptavidin-Perosidase，S-P)法免疫组化染色检测各组新生鼠生后6h、12h、24h、48h，脑组织TNF-а及Nogo-A的表达。 结果：1.子宫、胎盘HE染色病理学变化：各组子宫壁HE染色镜下均可见代表已孕的滋养细胞。NS组：子宫壁、胎盘轮廓清晰，细胞排列整齐，镜下偶见中性粒细胞；LPS组：子宫壁、胎盘充血水肿，轮廓不清晰，血管壁增厚，管腔不规则，可见大量反应性的中性粒细胞浸润；Dex组：子宫壁、胎盘轮廓尚清晰，可见少量反应性中性粒细胞。 2.脑组织HE染色病理学变化：NS组：脑组织结构未见明显改变，轮廓清晰；神经细胞排列整齐，细胞膜完整，细胞核染色均匀，神经细胞间质无异常，各时间点变化无明显差异。LPS组：脑组织水肿、疏松、稀化；神经细胞膜不完整可见凹陷改变，细胞核染色不均匀，细胞核基质破坏可见核碎裂及固缩，神经细胞间质水肿。Dex组：脑组织可见轻度水肿，未见组织明显稀疏，染色尚清晰；神经细胞胞膜较完整，偶可见缺损，细胞核可见少许碎裂，但无核固缩变化，神经细胞间质部分可见轻度水肿，各时间变化现相近，变化无明显差异。 3. TNF-а表达：NS组组内各个时间点TNF-а表达的比较，无统计学意义（P0.05）。LPS组新生鼠脑组织TNF-а表达生后6h迅速上升，12h表达达到高峰，高峰后维持在较高水平，组内各时间点比较无统计学意义（P0.05）。Dex组新生鼠脑组织TNF-а表达相同时间点高于NS组，差异无统计学意义。三组相同时间点，LPS组TNF-а表达明显高于NS组（P 0.01）、Dex组（P 0.05），差异有统计学意义，NS组和Dex组TNF-а比较，差异无统计学意义（P0.05）。 4. Nogo-A表达：NS组Nogo-A表达呈弱阳性，组内各个时点Nogo-A表达比较，无统计学意义（P0.05）。LPS组新生鼠脑组织Nogo-A表达于生后6h开始升高，12h升高迅速且达到高峰，24h仍处于高值但稍有下降，48小时明显下降，组内6h（P 0.01），24h（P 0.01），48h（P 0.01）的Nogo-A表达与12h比较，差异有统计学意义。Dex组Nogo-A表达较弱，组内各时间点比较无统计学意义（P0.05）。LPS组和NS组在6h，12h，24h时间点上，LPS组Nogo-A表达高于NS组（P 0.01），48h两者比较（P 0.05），差异有统计学意义。Dex组和LPS组Nogo-A的表达，48h两组的表达差异无统计学意义（P0.05），其余时间差异有统计学意义（P 0.05）。Dex组各个时间点Nogo-A表达高于NS组（P0.05），无统计学意义。 结论：1.LPS腹腔注射后，母鼠子宫壁、胎盘HE染色可见充血、水肿及大量中性粒细胞，且LPS组新生鼠脑组织稀疏，结构模糊，神经细胞胞膜破裂，细胞核染色不均变淡，神经细胞间质水肿。LPS可致宫内感染，宫内感染可致新生鼠脑白质损伤。 2. LPS组新生鼠脑组织的TNF-а表达，生后6h开始上升，12h表达达到高峰，高峰后持续在较高水平。而且LPS组TNF-а表达明显高于NS组（P 0.01），推测宫内感染脑白质损伤可能与细胞因子TNF-а有关联。 3.LPS组新生鼠脑组织Nogo-A表达于生后6h开始升高，12h升高迅速且达到高峰，24h仍处于高值但稍有下降，48小时明显下降。新生鼠脑组织Nogo-A表达LPS组与NS组比较各个时间点，差异有统计学意义。推测Nogo-A与宫内感染脑白质损伤有关，在脑白质损伤过程中可能发挥一定作用。 4.宫内感染母鼠给予Dex干预后，母鼠子宫壁、胎盘可见少量中性粒细胞，未见明显充血、水肿，新生鼠脑组织镜下水肿，未见明显疏松变化，神经细胞未见明显坏死变化，与LPS组比较镜下病理改变减轻。Dex组TNF-а表达和Nogo-A表达较LPS组均明显下降（P 0.05），与NS组比较有差异，但差异无统计学意义（P0.05）。推测Dex对减轻宫内感染致脑白质损伤发挥重要作用。
【关键词】：地塞米松 脑白质损伤 宫内感染 TNF-а Nogo-A
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R722.1
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-13
• 第1章 引言13-16
• 第2章 材料与方法16-22
• 2.1 实验动物16
• 2.2 主要实验仪器设备16-17
• 2.3 主要实验试剂17
• 2.3.1 动物模型实验试剂17
• 2.3.2 免疫组化检测试剂17
• 2.4 主要试剂配制17-18
• 2.5 实验动物分组18-19
• 2.6 指标测定和方法19-21
• 2.6.1 HE 染色观察脑组织及子宫、胎盘病理形态学改变19-20
• 2.6.2 S-P 免疫组化染色检测 TNF-а和 Nogo-A 蛋白表达20-21
• 2.8 统计学方法21-22
• 第3章 结果22-25
• 3.1 一般情况22
• 3.2 各组子宫、胎盘病理形态学改变22
• 3.3 各组新生鼠脑组织的病理形态学改变22-23
• 3.4 各组新生鼠脑组织的 TNF-а蛋白表达23-24
• 3.5 各组新生鼠脑组织 Nogo-A 蛋白表达24-25
• 第4章 讨论25-31
• 4.1 LPS 制备宫内感染的动物模型25-26
• 4.2 宫内感染致脑白质损伤26-27
• 4.3 宫内感染致脑白质损伤后 TNF-а的表达27-28
• 4.4 宫内感染致脑白质损伤后 Nogo-A 的表达28-29
• 4.5 Dex 对宫内感染致脑白质损伤后 TNF-а和 Nogo-A 表达的影响29-31
• 第5章 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-35
• 附图35-38
• 攻读学位期间的研究成果38-39
• 综述39-43
• 参考文献42-43

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1 赵红洋;朱薇薇;王金丽;;Nogo-A及Nogo受体抑制剂/拮抗剂的神经防护作用[J];中国医药导报;2011年35期

2 赵红洋;朱薇薇;王金丽;;Nogo-A蛋白及Nogo受体抑制剂防治中枢神经系统疾病的研究进展[J];中国当代医药;2011年36期

3 苏桂云;朱薇薇;王丽;;Nogo-A及其受体拮抗剂在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤修复中的作用机制[J];中国儿童保健杂志;2010年02期

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本文编号：486659