Notch4通路与LCWE诱导的冠状动脉损伤关系的初步探讨

发布时间：2017-06-29 22:17

  本文关键词：Notch4通路与LCWE诱导的冠状动脉损伤关系的初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 借助于LCWE诱导的川崎病冠状动脉炎的小鼠模型,探究Notch4信号通路在川崎病免疫性冠状动脉炎中的作用。 方法： 干酪乳杆菌购自CICC(中国工业微生物菌种保藏管理中心),取对数生长期细菌用于所有实验。 第一部分：LCWE诱导的冠状动脉炎动物模型的建立 干酪乳杆菌首先在MRS broth中培养24小时,SDS过夜裂解细菌,依次加入RNase, DNase和胰酶,超声处理破碎细胞,离心取上清,使用硫酸-苯酚比色法检测上清液中糖总量。向BALB/c小鼠腹腔注射LCWE0.5ml(处理组)和PBS0.5ml(对照组),3天、7天、14天及28天后处死小鼠,取心脏和脾脏用4%多聚甲醛中常规固定,HE染色观察心脏和脾脏的病理变化。使用Real-time PCR技术检测脾脏Thl/Th2细胞因子谱的变化。 第二部分：Notch4通路与LCWE诱导的冠状动脉损伤关系 3天、7天、14天及28天摘除小鼠眼球取血,先后加入cd34-eFlour66010ul,Flk-1FITC2ul, Notch4-PE5ul, cd45-PE-Cy5.50.5ul孵育,上机检测外周血单个核细胞中EPCs含量及其表面Notch4表达情况。设计引物GAPDH、Notch4、RBP-JK、 vcam-1和P-selectin,使用Real-time PCR技术检测胸主动脉、心肌组织Notch4、 RBP-JK、vcam-1和P-selectin mRNA表达情况。使用免疫组化技术检测胸主动脉、冠状动脉起始部vcam-1和P-selectin表达情况。 结果： 第一部分：LCWE诱导的冠状动脉炎动物模型的建立 1.3天时实验组小鼠体重明显减轻。 2.心肌HE染色显示各时间点实验组冠状动脉及其分支靠血管外膜处出现炎症细胞浸润。 3.实验组脾脏大体观察脾脏体积增大,重量增加,HE染色发现各时间点主要以脾小体增生,融合。 4.实验组除IL-6外,其他Thl/Th2细胞因子表达量显著增加。 第二部分：Notch4和RBP-JK与冠状动脉损伤相关 1.LCWE注射3天小鼠外周血循环内皮祖细胞的含量显著高于对照组,14天时实验组EPCs含量低于对照组；LCWE注射7天EPCs表面Notch4表达量明显高于对照组。 2.14天,28天实验组胸主动脉P-selectin mRNA和RBP-JK mRNA表达水平显著高于对照组,P-selectin与RBP-JK,Notch4与vcam-1显著相关；心肌中P-selectin与RBP-JK显著相关。 3.实验组冠状动脉起始部血管内皮细胞vcam-1表达除7天外,各时间点表达均不同程度升高,其中以3天组升高最为明显；胸主动脉中段实验组3,7天vcam-1表达高于对照组,但表达强度不及3天冠脉起始部；实验组P-selectin冠脉起始部14天,28天表达高于对照组,胸主动脉中段14天时强于对照组。 结论： 1.循环内皮祖细胞Notch4信号通路参与了LCWE诱导的冠状动脉炎的发生和发展。 2.血管内皮细胞Notch4信号通路与LCWE诱导的冠状动脉损害有关。 3.血管内皮细胞Notch4信号通路的改变影响了冠状动脉内皮细胞的功能。
【关键词】：川崎病 Notch4 RBP-JK 循环内皮祖细胞 血管细胞粘附分子-1 P选择素
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R725.4
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文缩写词与中英文索引11-12
• 目次12-13
• 1 引言13-17
• 2 材料与方法17-29
• 2.1 材料17-19
• 2.2 实验方法19-29
• 3 结果29-41
• 3.1 一般情况29
• 3.2 病理学变化29-30
• 3.3 脾细胞Th1/Th2 mRNA表达30-31
• 3.4 循环内皮祖细胞及其表面Notch4表达量变化31-32
• 3.5 胸主动脉及心肌P-selectin、RBP-JK、vcam-1、Notch4 mRNA表达32-36
• 3.6 胸主动脉、冠状动脉起始部vcam-1及P-selectin免疫组化36-41
• 4 讨论41-44
• 5 结论44-45
• 参考文献45-48
• 综述48-60
• 参考文献57-60
• 作者简历及在学期间所取得的科研成果60

【参考文献】

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  本文关键词：Notch4通路与LCWE诱导的冠状动脉损伤关系的初步探讨，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：499563