人支气管上皮细胞的获取与培养

发布时间：2017-08-05 15:18

  本文关键词：人支气管上皮细胞的获取与培养

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【摘要】：目的:建立可靠的人支气管上皮细胞原代培养方法及鉴定技术。方法:手术切除的新鲜肺组织,去除支气管外的其他组织,保留主支气管和小的支气管,使用PBS液充分冲洗后,去除多次的连接组织和淋巴结,只保留气管软组织,并剪成1×1cm大小的碎片,加入含蛋白酶XIV的消化液中,4℃过夜消化,收集细胞悬液,接种在包被好TypeI/III胶原的培养瓶中,无血清培养基进行原代培养。通过倒置显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行鉴定。结果:1.蛋白酶XIV消化分离支气管上皮细胞可获得较多单个支气管上皮细胞,HE染色可见纤毛细胞、基细胞。2.分离的支气管上皮细胞在无血清培养基中生长良好,1天后细胞逐渐贴壁,细胞小,分布均匀,多成圆形;3-4天后细胞开始逐渐变大、呈多边形;7-10天生长旺盛,可见成片的扁平状、多边形,呈铺路鹅卵石样分布生长。10天后生长缓慢、停止生长,细胞逐渐老化,出现空泡。3.兔抗人的角蛋白8单克隆抗体鉴定原代培养的细胞,胞浆呈棕黄色着色。结论:1.蛋白酶XIV低温过夜消化可获得的较多单个支气管上皮细胞。2.无血清培养基可提供满意的支气管上皮细胞生长条件,提高细胞纯度。3.角蛋白8单克隆抗体免疫组化染色可简单有效的鉴定支气管上皮细胞。
【关键词】：支气管上皮细胞 细胞培养 鉴定 人
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 引言9-11
• 1．材料与方法11-19
• 1.1 组织来源11
• 1.2 实验器械及仪器11-12
• 1.3 主要试剂及来源12-14
• 1.4 主要溶液配制14-16
• 1.5 实验方法与步骤16-19
• 2．结果19-26
• 2.1 HE染色19-20
• 2.2 台盼蓝染色20-21
• 2.3 形态学观察21-24
• 2.4 免疫组化鉴定24
• 2.5 支气管上皮细胞生长曲线24-25
• 2.6 细胞复苏25-26
• 3．讨论26-31
• 4．结论31-32
• 参考文献32-37
• 综述37-49
• 参考文献44-49
• 在读期间发表的主要学术论文及参与课题49-51
• 致谢51-52

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 黄维琳;;人支气管上皮细胞体外不同培养基培养效果比较[J];黔南民族医专学报;2007年04期

2 唐隽;马玲国;何发尧;张剑利;王跃建;;气管黏膜上皮细胞无血清培养的初步实验研究[J];山东大学耳鼻喉眼学报;2005年06期

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本文编号：625548