miRNA-221对气道平滑肌细胞外基质的作用及机制研究

发布时间：2017-08-16 07:02

  本文关键词：miRNA-221对气道平滑肌细胞外基质的作用及机制研究

  更多相关文章： 大鼠 气道平滑肌细胞 microRNA 细胞外基质 miR-221 气道平滑肌细胞 细胞外基质 PI3K/AKT

【摘要】：目的探讨生长因子PDGF-BB及EGF干预大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)后不同microRNA (miR)及细胞外基质(extracellular matrix, ECM)表达量的变化。方法将ASMCs分为对照组、PDGF-BB组和EGF组,利用PDGF-BB、EGF刺激大鼠ASMCs,采用实时定量PCR (Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)技术检测ASMCs中miR的变化。同时用Western Blot检测细胞外基质I型胶原蛋白(collagen Ⅰ )、 Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达水平。结果PDGF-BB刺激ASMCs后,与对照组相比,miR-221相对表达量增加(P 0.05); EGF刺激ASMCs后,与对照组相比,miR-221、miR-192相对表达量增加(P0.05)。 PDGF-BB、EGF刺激大鼠ASMCs后与对照组相比,I型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达量均较对照组升高(P0.05)。结论PDGF-BB、EGF干预大鼠气道平滑肌细胞后,不同microRNA的表达量有不同的变化。PDGF-BB、EGF能增加大鼠气道平滑肌细胞ECM的表达。目的探讨miRNA-221对气道平滑肌细胞外基质的作用及机制方法利用miR-221 mimics转染大鼠气道平滑肌细胞,用RT-qPCR方法验证miR-221的转染效率。采用Western Blot技术检测I型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达水平。应用基因芯片技术检测miRNA-221刺激ASMCs细胞外基质沉积过程中信号通路的变化。采用Western Blot技术检测磷酸化AKT及总AKT蛋白表达水平的变化,及使用PI3K-AKT通路抑制剂LY294002干预后,观察磷酸化AKT、总AKT、COL1A2、COL3A1的表达水平的变化。结果转染miR-221后,miR-221的表达水平较过表达对照组明显升高。miR-221过表达后,COL1A2、COL3A1的表达水平也升高。生物信息学分析及Western Blot结果证实PI3K/AKT通路参与miRNA-221促进ASMCs细胞外基质表达的过程。PI3K-AKT通路的抑制剂LY294002可以逆转miR-221引起的气道平滑肌细胞的COL1A2、COL3A1的表达量的增加。结论miR-221通过活化PI3K/AKT信号通路来促进气道平滑肌细胞外基质的表达。
【关键词】：大鼠 气道平滑肌细胞 microRNA 细胞外基质 miR-221 气道平滑肌细胞 细胞外基质 PI3K/AKT
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R725.6
【目录】：

• 中英文缩略词对照表5-7
• 第一部分 不同生长因子干预大鼠气道平滑肌细胞后microRNA及细胞外基质的变化7-30
• 中文摘要8-9
• 英文摘要9-10
• 前言10-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-27
• 讨论27-30
• 第二部分 miR-221对气道平滑肌细胞外基质的作用及化制研究30-47
• 中文摘要31-32
• 英文摘要32-33
• 前言33-34
• 材料与方法34-40
• 结果40-44
• 讨论44-47
• 小结47-48
• 参考文献48-55
• 综述55-68
• 参考文献63-68
• 攻读学位期间科研成果及获得奖励小结68-70
• 致谢70

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本文编号：681918