CD40siRNA对EAM大鼠外周血IL-22、IL-6及TNF-α表达的影响

发布时间：2017-08-25 07:08

  本文关键词：CD40siRNA对EAM大鼠外周血IL-22、IL-6及TNF-α表达的影响

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【摘要】：研究背景：病毒性心肌炎(viral myocarditis, VMC)是指病毒感染引起心肌细胞变性、坏死,间质中炎性细胞浸润及纤维渗出的疾病,是引起青少年突然死亡的重要原因,心内膜心肌活组织检查是确诊的金标准[1]。目前心肌炎的发病机制尚未完全阐明,但有确凿证据表明,病毒感染后,心脏抗原表位暴露引起的自身免疫反应,是心肌炎重要的发病机制,其中T细胞介导的免疫反应发挥重要作用。实验性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocarditis, EAM)大鼠是目前研究心肌炎自身免疫反应机制公认的动物模型[2]。白细胞介素-22(interleukin 22, IL-22)主要由新近发现的CD4+T细胞亚型Th22细胞分泌。IL-22根据其参与免疫反应的途径不同,发挥促炎或抗炎作用。IL-22可作为促炎性细胞因子,增加滑膜成纤维细胞中单核细胞趋化蛋白的表达,促进结肠上皮下成纤维细胞外周炎性因子和趋化因子的聚集。在心肌组织,IL-22可下调EAM大鼠免疫细胞1mRNA和蛋白的表达,减轻心肌组织炎症,发挥抗炎作用。IL-22在VMC小鼠中明显升高[3],应用Anti-IL-22Ab治疗VMC小鼠可降低IL-22的表达、增加心肌组织中炎性细胞的浸润。Hanawa等将IL-22-Ig融合基因作用于EAM大鼠,可上调IL-22的表达,减轻EAM大鼠心肌炎症[4]。RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术通过siRNA(small interfering RNA, siRNA)参与真核细胞抵抗感染的防御机制,在转录水平,调节任何目的基因的表达。我们前期应用CD40小分子干扰RNA(CD40siRNA)下调EAM大鼠CD40基因的表达,阻断CD40/CD40L共刺激通道,证实CD40siRNA可减轻EAM大鼠心肌炎症15-6],但其具体作用机制尚未完全阐明。目的：探讨IL-22在EAM大鼠中的变化规律及CD40siRNA对EAM大鼠外周血IL-22、IL-6及TNF-a表达的影响及其临床意义。研究方法：将48只6-8周雄性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAM组、CD40siRNA组及siRNA组。免疫第0天与第7天,对正常对照组大鼠双后肢足垫区注射PBS缓冲液0.2m1,对EAM组、CD40siRNA组和siRNA组大鼠双后肢足垫区注射已混匀的猪心肌球蛋白与完全弗氏佐剂的混悬液0.2m1。免疫第7天,对CD40siRNA组、siRNA组大鼠尾静脉分别注射CD40siRNA慢病毒表达载与siRNA慢病毒表达载体0.2m1,病毒量为5×107TU。在免疫第21天,每组处死6只大鼠,免疫第56天,处死剩余全部大鼠,光镜与电镜下观察各组大鼠心肌组织病理及超微结构的改变,计算心肌组织病理积分,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清cTnT、 BNP、IL-22、IL-6及TNF-α的浓度。结果：1.EAM组、CD40siRNA组和siRNA组大鼠心肌炎发病率均为100%,至免疫第56天,CD40siRNA组和正常对照组大鼠无死亡,EAM组与siRNA组大鼠分别死亡2只,各组大鼠死亡率无统计学差异(P0.05)。2.在急性期与慢性期,CD40siRNA组大鼠心肌组织病理积分均较EAM组显著减(P均0.05),siRNA组与EAM组无统计学差异(P均0.05)。CD40siRNA组慢性期心肌组织病理积分较急性期明显降低(P0.05), EAM组急性期与慢性期无统计学差异(P0.05)。3.在急性期与慢性期,CD40siRNA组大鼠外周血cTnT和BNP的水平均较EAM组明显降低(P0.05),siRNA组与EAM组无统计学差异（P0.05)。CD40siRNA组和EAM组大鼠慢性期cTnT和BNP的水平均较急性期显著降低(P均0.05)。EAM组大鼠外周血cTnT和BNP的水平与心肌组织病理积分之间均存在显著的正相关关系(r=0.732,r=0.869,P均0.05)。4.在急性期与慢性期,CD40siRNA组、EAM组及siRNA组大鼠外周血IL-22的水平均较正常对照组显著升高(P均0.05),CD40siRNA组均明显高于EAM组(P均0.05),siRNA组与EAM组无统计学差异(P0.05)。CD40siRNA组和EAM组大鼠慢性期IL-22的水平均较急性期显著升高(P均0.05)。5.在急性期与慢性期,CD40siRNA组、EAM组及siRNA组大鼠外周血IL-6和TNF-a的水平均较正常对照组明显升高(P均0.05),CD40siRNA组IL-6和TNF-a的水平均明显低于EAM组(P均0.05),siRNA组与EAM组无统计学差异(P0.05)。CD40siRNA组和EAM组大鼠慢性期IL-6、TNF-α的水平均较急性期显著降低(P均.05)。6.EAM组大鼠外周血IL-22的水平与心肌组织病理积分、cTnT及BNP之间不存在相关关系(r=0.104, r=-0.507, r=-0.039, P均0.05),IL-6、TNF-α的水平与心肌组织病理积分、cTnT及BNP之间均呈正相关关系(IL-6:r=0.764, r=0.962, r=0.810; TNF-α:r=0.697, r=0.946, r=0.750, P均0.05)。结论：1.CD40siRNA能显著减轻EAM大鼠心肌炎症,降低心肌损伤程度,改善心功能,对EAM大鼠有治疗作用。2.EAM组大鼠外周血IL-22的表达明显升高,其慢性期水平显著高于急性期。3.EAM组大鼠外周血IL-6与TNF-α的表达均明显升高,且其水平与心肌组织病理积分、cTnT及BNP呈正相关关系,可作为评估心肌炎严重程度的临床指标。4.CD40siRNA对EAM大鼠的治疗作用可能与上调IL-22的表达,下调IL-6和TNF-α的水平有关。
【关键词】：自身免疫性心肌炎 大鼠 CD40小分子干扰RNA 肌钙蛋白T 脑钠肽 白细胞介素-22 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R725.4
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符号说明12-13
• 前言13-16
• 材料与方法16-19
• 结果19-21
• 讨论21-26
• 结论26-27
• 附图表27-32
• 参考文献32-36
• 综述36-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49
• 攻读硕士学位期间发表的论文49-50
• 附件50

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本文编号：735742